Félix Octave Mayet

“ Une fois le lavage des globules opéré, ou bien après simple séparation du sérum surnageant pour le sang de cheval, on procède au traitement du cruor par le liquide qui, agité vivement avec lui, doit mettre en liberté l'hémoglobine et la faire passer à l'état de solution aqueuse presque pure suffisamment concentrée. ”

“ Pour le sang de chien, la séparation de la plus grande partie du sérum n'est pas possible par simple décantation, et il y aurait de sérieux inconvénients pour la pureté du produit et pour la régularité de la cristallisation à s'en passer. Il en est de même pour le sang humain. ”

“ On doit avoir mesuré exactement le volume de la solution d'hémoglobine au moyen d'une éprouvette graduée. L'alcool n'y est pas ajouté brusquement. Il est introduit goutte à goutte au moyen d'une pipette graduée, ce qui permet d'apprécier rigoureusement le volume employé.
A chaque goutte qui tombe, on agite vivement la solution avec une baguette de verre pour le diffuser et éviter qu'il agisse à l'état de concentration ou que dans sa combinaison avec l'eau de la solution la température s'élève. ”

“ On obtiendra cependant plus de garanties de pureté en lavant le cruor. Le sulfate de soude réussissant moins bien, parfois dans ce cas que le liquide d'Hoppe-Seyler, on peut préfèrer celui-ci. Il faut éviter avec un soin extrême que la température du mélange s'élève au-dessus de 0°, car les globules de cheval deviennent beaucoup plus facilement altérables par la moindre élévation de température. Pour ce sang, déjà privé des 2/3 de son sérum, on a l'avantage de pouvoir n'employer que 4 ou 5 fois son volume primitif de liquide laveur, tout en obtenant un résultat aussi parfait. ”

“ Quand on emploie la benzine de Lyon, la solution d'hémo- globine a toujours une couleur magnifique d'un rouge vermillon qui contraste avec la teinte brune de celle qui est fournie par l'éther, et la cristallisation, toujours plus abondante, donne des cristaux plus volumineux et plus réguliers. ”

“ Il est beaucoup préférable en raison du passage lent du liquide d'employer un filtre formé d'un cône de toile un peu claire.
Si la température extérieure est basse, cette filtration peut se faire sans précaution spéciale, l'hémoglobine étant préservée contre l'altération par la petite quantité d'alcool dilué qui reste interposée, car à l'état de dilution l'alcool la conserve au lieu de la décomposer. ”

“ Ce vase présente les avantages suivants pour le lavage des globules : La forme allongée permet de l'introduire dans une cuve en bois de 0m,80 de haut sur 0m,30 de diamètre, à parois très épaisses de 0m,05 environ, que j'ai fait construire à cet effet. Dans cette cuve munie d'un couvercle de bois on place autour de lui de la glace dans de bonnes conditions de défense contre la température extérieure, en raison de l'épaisseur des parois et de leur peu de conductibilité. ”

“ On met exactement la quantité d'eau nécessaire pour dissoudre complètement l'hémoglobine. En ne dépassant pas 40° et en procédant rapidement on ne l'altère pas. La solution rapidement refroidie à 0° est additionnée de Ij5e en volume d'alcool absolu. On met au mélange réfrigérant et procède comme précédemment. Une troisième cristallisation et même une quatrième pour le sang de cheval traité sans lavage sont opérées de même avec les cristaux obtenus par la deuxième,
mais auparavant on doit procéder à une opération préalable. ”

“ Il vaut mieux, en effet, ne diluer le cruor par l'eau qu'en présence de la benzine. On bouche alors et mélange le tout en agitant vivement l'éprouvette pendant cinq minutes. Par cette agitation, la benzine met en liberté l'hémoglobine. Il se forme une émulsion de benzine et d'hémoglobine, unie aux stromas qui donne .un liquide opaque, épais, uniformément coloré en rouge vermillon. ”

“ Pour le moment, je m'en tiens au sulfate de soude pour le sang de chien et d'homme et au chlorure de sodium pour celui de cheval.
2° Récipient dans lequel se fait le lavage.
Hoppe-Seyler n'indique pas de vase spécial pour cette opération. L'emploi d'un vase à précipiter ou d'un flacon a des inconvénients sérieux.
Une fois les globules descendus au fond, il est très difficile de séparer complètement le liquide de lavage. ”

“ Le liquide enlevé n'est d'aillenrs jamais absolument incolore; il contient toujours un certain nombre de débris de globules désagrégés, un peu d'hémoglobine diffusée et des globules rouges peu denses qui restent en suspension.
Pour le sang de cheval, avons-nous dit, le lavage n'est pas absolument indispensable. Les globules tombent en 5 heures au fond du vase, les 2/3 ou un peu plus du sérum peuvent être enlevés à la pipette ou au siphon, les globules ne s'altèrent pas pourvu qn'on maintienne le sang à 0° en plongeant le récipient dans l'eau glacée. ”

“ L'eau fait diffuser l'hémoglobine, mais elle a trois inconvénients : 1° Cette diffusion ne peut être obtenue notablement que par un excès de ce dissolvant qui donne des solutions trop étendues d'hémoglobine qu'on ne peut faire cristalliser, leur concentration étant impossible sans altérer cette subsr tance ; 20 Les stromas ne peuvent être séparés de la solution ainsi obtenue, car ils restent ductiles et passent à travers les filtres, et cela est un obstacle à la cristallisation régulière ; 3" L'eau ne s'empare pas des matières grasses, principale cause d'impureté. ”

“ L'oxyhémoglobine recueillie doit être desséchée avec des soins particuliers avant d'être soumise aux diverses expérimentations nécessaires pour apprécier exactement sa composition et son rôle physiologique et pour établir son dosage sur des bases irréprochables. ”

“ La benzine peut, au contraire, être agitée indéfiniment avec une solution d'hémoglobine sans amener son altération.
Tous ces arguments démontrent surabondamment la supériorité du réactif que je préconise. Il suffit pour s'en convaincre de traiter simultanément le même sang d'un côté pour la benzine, de l'autre par l'éther. Alors même qu'on a pris la précaution de se ”

“ Hoppe-Seyler sépare alors aussi bien que possible la couche liquide sus-jacente au moyen d'un siphon plongé, avant d'être amorcé jusque près de la surface delà couche de cruor.
Cette séparation ne peut jamais être absolument complète, sans qu'on s'expose à perdre une notable quantité de cruor par l'aspiration ; aussi allons-nous indiquer un procédé pour
obvier à cet inconvénient du siphon. ”

“ Débouchant l'éprouvette et ouvrant le robinet, j'évacue lentement la couche inférieure. On peut même évacuer la couche intermédiaire où flottent les stromas, car on
s'en débarrassera plus tard, ainsi que nous allons l'indiquer. ”