Edouard Van Beneden

“ Il ressort clairement delà que l'œuf n'est pas fécondé dès le moment où le zoosperme a pénétré dans le vitellus; cette pénétration n'est pas la fécondation, mais un phénomène préalable à la fécondation au même titre que les phénomènes de maturation. C'est pourquoi nous avons distingué la copulation des éléments sexuels de l'unification de ces éléments. C'est cette unification qui constitue la fécondation proprement dite; c'est-à-dire la génèse de la cellule, capable de division, qui représente virtuellement le nouvel individu. ”

“ Le fait qu'une partie du protoplasme ovulaire est expulsée, en même temps que les résidus nucléaires que nous appelons globules polaires, permet de supposer que le spermatozoïde fournit, lors de la fécondation de l'œuf, non seulement un élément nucléaire, le pronucleus mâle, mais aussi des éléments protoplasmiques destinés à remplacer les substances périvitellines. Il est certain que le zoosperme apporte dans le vitellus non seulement un noyau, mais aussi du protoplasme. Rien n'autorise à affirmer que le rôle du protoplasme spermatique est secondaire dans la fécondation ”

“ L'étude de la maturation de l'œuf, de la fécondation et de la division cellulaire m'a confirmé dans l'idée que les noyaux cellulaires sont hermaphrodites et cela d'autant plus que la chromatine mâle ne se confond pas avec la chromatine femelle. Si le pronucleus mâle et le pronucleus femelle méritent ces dénominations, qui impliquent leur sexualité, les noyaux cellulaires sont manifestement hermaphrodites. Les cellules des tissus partagent ce caractère avec les protozoaires et les protophytes.
Je ne considère pas la fécondation comme une génération. ”

“ Ce qui reste du vitellus, si par l'imagination l'on écarte les sphères hyalines et les gouttelettes homogènes, c'est une substance claire, finement ponctuée, et fortement chargée de corpuscules réfringents et brillants. Cette substance forme à la périphérie de l'œuf une couche continue et à son intérieur un système de lames, de puissance variable, anastomasées entre elles, qui remplissent complètement les espaces laissés entre les sphères hyalines et les gouttelettes homogènes. ”

“ Chaque cordon fournit une moitié de sa substance à chacun des noyaux filles. Si nous nous rappelons que des quatre anses constitutives du disque équatorial deux proviennent du pronucleus mâle, tandis que les deux autres dérivent du pronucleus femelle, nous en arrivons à cette conclusion que chaque noyau fille reçoit la moitié de sa substance chromatique du zoosperme, l'autre de l'œuf. Si les pronucleus ont un caractère sexuel, si l'un est mâle, l'autre femelle, il est clair que les noyaux des deux premiers blastomères sont hermaphrodites. ”

“ Le résultat de la fécondation, c'est la formation d'une cellule capable de se diviser et de donner naissance à un individu semblable aux progéniteurs. Ce n'est qu'après l'expulsion du second globule polaire et de la seconde couche périvitelline que le spermatozoïde subit les modifications qui annoncent l'imminence de la fécondation, c'est à dire de l'unification des deux cellules sexuelles. Jusqu'à ce moment l'œuf n'a fait que se préparer à la fécondation. ”

“ Il en résulte que la paroi de l'ovaire et de la partie supérieure de l'oviducte ne présentent à considérer que deux membranes intimement unies l'une à l'autre : l'externe anhyste qui présente l'apparence d'une mince cuticule est la tunique propre; l'interne, cellulaire, est le revêtement épithélial du tube sexuel. La moitié inférieure de l'oviducte, l'utérus et le vagin ont leur paroi formée de trois couches : une tunique musculaire, une tunique propre et une tunique épithéliale. ”

“ La génèse de ces globules et de ces couches s'effectue avec une grande lenteur et exige un temps considérable. Tant qu'elle n'est pas achevée le zoosperme se maintient au milieu du vitellus sans se confondre avec lui; et comme il est prouvé, d'autre part, que l'élimination des globules polaires et du liquide périvitellin, quoique s'accomplissant parfois après l'imprégnation, n'est nullement déterminée par la pénétration de
l'élément mâle, il n'y a aucune raison de considérer l'œuf comme étant fécondé par le seul fait de la présence d'un zoosperme dans son vitellus. ”

“ Le corps réfringent diminue rapidement de volume : il perd sa forme conoïde, et devient globulaire. Sa réfringence reste la même. Le globule devient de plus en plus petit et, parfois, il finit par se fondre complètement. Les derniers vestiges du corps réfringent ne disparaissent d'habitude que lorsque le zoosperme est déjà devenu central. Cette circonstance est très précieuse en ce qu'elle permet de reconnaître, avec une parfaite évidence, que l'élément coloré qui occupe le centre de l'œuf n'est pas la vésicule germinative, qui occupait cette place avant l'imprégnation, mais bien le zoosperme. ”

“ L'œuf ovarien fournit au gonocyte ovulaire un corps protoplasmique réduit par la soustraction des substances qui constituent les couches périvitellines et un noyau réduit par suite du rejet des éléments, en partie chromatiques, en partie achromatiques, qui entrent dans la composition des globules polaires. La vésicule germinative subit une première réduction lors de sa disparition apparente : une partie de sa substance se confond à ce moment avec le protoplasme ovulaire. L'œuf ovarien réduit je l'appelle gonocyte femelle; le noyau réduit c'est le pronucleus femelle. ”

“ J'ai fait plus haut l'histoire de la membrane vitelline; elle se forme peu à peu aux dépens de la couche superficielle du protoplasme ovulaire pendant la première période de la maturation de l'œuf. Au moment où l'œuf est prêt à recevoir le zoosperme, cette membrane peut être isolée. Elle présente à ce moment une solution de continuité au pôle d'imprégnation et, au moment de la copulation, la membrane du zoosperme vient se mettre en continuité par son bord libre avec le bord libre de la membrane vitelline. ”

“ Si l'on trouve des spermatozoïdes dans la plus grande partie de l'utérus, c'est que chaque œuf entraîne avec lui, non pas seulement le spermatozoïde qui a réussi à se fixer à son pôle d'imprégnation et qui pénètrera bientôt à l'intérieur du vitellus, mais un nombre plus ou moins considérable de zoospermes accidentellement accolés à sa surface et qui n'interviennent en rien dans la fécondation. ”

“ Le grand axe de l'ovoïde ne l'emporte que fort peu sur son petit axe. Un examen attentif de la forme extérieure de l'œuf, et plus encore l'étude de sa structure, démontrent l'existence dans ces œufs d'un axe morphologique, dont les extrémités, que j'appelle les pôles de l'œuf, présentent une valeur tout différente tant au point de vue anatomique qu'au point de vue physiologique. L'un de ces pôles est prédestiné à recevoir le zoosperme : par ce point seul l'élément fécondateur peut pénétrer dans le vitellus ”

“ Les strates sont concentriques au bouchon d'imprégnation, qui occupe le pôle principal de l'œuf. Les strates, au nombre de trois, affleurent toutes à la surface : les deux internes viennent constituer superficiellement des anneaux concentriques, le disque polaire et la région parapolaire ; la plus externe a l'apparence d'une calotte hémisphérique. On pourrait comparer l'œuf à un système de cônes emboités les uns dans les autres.
La vésicule germinative occupe toujours primitivement le milieu de la couche intermédiaire; elle confine au noyau médullaire et parfois proémine dans ce dernier. ”

“ Quelle que soit du reste sa valeur il est tout à fait certain que le zoosperme fournit au pronucleus mâle autre chose encore que des éléments chromatiques. L'analogie avec ce qui passe dans l'œuf nous porte à supposer que, en ce qui concerne le pronucleus mâle, les éléments achromatiques qui forment une couche bien délimitée autour de la masse chromatique ont, comme ceux du pronucleus femelle, une origine nucléaire. ”

“ Tant qu'il est libre le zoosperme ne montre aucune affinité pour les matières colorantes ; son noyau se colore vivement en rouge par le carmin boracique ou le picrocarmin; mais son corps protoplasmique reste parfaitement incolore. Mais à peine s'est-il fixé au bouchon d'imprégnation que tout le zoosperme acquiert la propriété de fixer énergiquement le carmin; nonseulement son noyau, mais tout son hémisphère céphalique et même le revêtement protoplasmique de la queue se colorent vivement en rouge ; seul le corps réfringent reste parfaitement incolore. ”

“ Une fois que le spermatozoïde a son corps dans la protubérance il secoue rudement les granules lécithiques qui l'entourent, grâce aux ondulations de sa queue, qui est toute entière en dehors. Sous l'influence de ce mouvement violent, le sarcode vitellin se soulève autour du corps et le dépasse en formant une sorte de houppe. Tout à coup la queue devient immobile, la houppe rentre dans le vitellus en laissant à la surface une petite excavation d'où sort le cil vibratil du zoosperme. Le corps du spermatozoïde devient le centre d'une figure étoilée et s'avance vers le noyau femelle. ”

“ Il n'existe aucune observation sur la formation du premier noyau embryonnaire chez les Axolotl et chez les Crapauds. Rien ne prouve que chaque zoosperme fournit un pronucleus mâle; rien n'établit que les divers spermatozoïdes qui entrent dans le vitellus interviennent dans la formation du premier noyau embryonnaire. Il est possible que tous ces éléments spermatiques, à l'exception d'un seul, ne jouent qu'un rôle tout à fait accessoire, analogue a celui qui revient chez le Lapin, aux filaments qui s'accolent extérieurement au globe vitellin pour se confondre ultérieurement avec lui. ”

“ Il est clair, d'après cela, qu'un blastomère, qui n'est en définitive qu'une cellule ordinaire, présente un axe de structure comme un œuf et un zoosperme ; que les pôles de cet axe sont de valeur inégale et que le véritable centre dynamique de la cellule ne siège pas dans le noyau, mais dans la sphère attractive qui finit pas disparaître. Cela explique pourquoi les radiations du protoplasme ovulaire ne sont pas dirigées vers la vésicule germinative. ”

“ Au contraire, dans l'œuf arrivé à maturité complète, le bouchon d'imprégnation se trouve généralement à l'extrémité du grand axe de l'ovoïde. Ce fait s'explique facilement si l'on admet que l'ovoïde primitif s'allonge dans le sens de son petit axe ou axe principal et qu'il se raccourcit dans la direction opposée. L'axe morphologique de l'œuf mûr, qui se confond d'habitude avec son axe de figure, répond donc à l'axe primitif de l'œuf, au moment où il présente la forme d'une massue, ou, si l'on veut, à l'axe de la queue ovulaire. ”

“ La substance du disque se colore en rose-brun et la teinte qu'il affecte est toute différente de celle des sphères hyalines et de la vésicule germinative (pl. X, fig. 3 et 4) . Mais bientôt le disque ne se
colore plus également dans toute son épaisseur : tandis que sa partie profonde montre une grande affinité pour la matière colorante, sa couche superficielle reste à peu près incolore (fig. 4) . Je donnerai respectivement à ces deux couches constitutives du disque les noms de couche chromophile et couche achromophile. La couche chromophile est beaucoup plus puissante que l'autre. ”

“ Entre les œufs se trouvent toujours beaucoup de zoospermes non copulés. Mais le doute sur la question de savoir si un zoosperme a bien pénétré dans le vitellus, ou s'il n'est pas simplement accolé à la surface de l'œuf, ce doute n'est pas possible et voici pour quel motif. Dès le moment où un spermatozoïde s'est fixé au bouchon d'imprégnation son corps protoplasmique a acquis des propriétés particulières, qui permettent de distinguer immédiatement un zoosperme copulé d'un spermatozoïde libre. ”

“ Les œufs utérins sont agglutinés les uns aux autres au moyen d'une substance visqueuse, homogène ou granulée, qui gonfle beaucoup sous l'action de l'acide acétique; elle se coagule par l'alcool et se teinte en rose par les matières carminées. Cette substance est probablement un produit de secrétion de l'épithélium de l'utérus. Je pense que la couche à bâtonnets, qui revêt les œufs utérins, est un produit de différentiation de cette substance : par l'acide acétique les bâtonnets gonflent, s'allongent considérablement et tendent à se confondre avec la substance agglutinative interovulaire. ”

“ On peut parfaitement, sur le vivant, observer toutes les phases de la pénétration des zoospermes.
Les œufs frais retirés de la portion inférieure de l'uterus et du vagin montrent distinctement les diverses membranes, les deux globules polaires et les pronucleus qui siègent dans le vitellus retracté. Mais on ne peut arriver, par l'étude des œufs frais, à s'édifier ni sur la formation des globules polaires, ni sur l'histoire du spermatozoïde. ”

“ Ce phénomène si particulier de la génèse d'une cellule aux dépens de deux éléments différents parait intimement lié au rejet, par la cellule œuf d'une part, par le spermatocyte de l 'atitre, de certains produits : de globules polaires et de couches périvitellines, quand il s'agit de l'œuf, de portions cytophorales pour le spermatocyte. Chez l'ascaride du cheval, chaque spermatogonie donne naissance, par divisions successives, à deux spermatogemmes composés chacun de quatre cellules-filles et chacune de ces dernières ne devient un spermatozoïde qu'après avoir expulsé une partie de sa substance. ”

“ Si telle est la constitution des noyaux, dans les cellules des tissus de l'ascaride du cheval, il est probable qu'il doit en être de même pour les œufs et pour les spermatogonies. Dans l'œuf ovarien toute la substance chromatique se concentre dans l'élément que l'on appelle le nucléole ovulaire; certes cet élément n'est pas l'équivalent de ce que Flemming et Retzius appellent des nucléoles dans les cellules des tissus. Tout le réticulum chromatique, y compris les nucléoles, parait
s'être condensé dans le corpuscule germinatif. ”

“ Mais si le pronucleus femelle n'est pas l'équivalent d'un noyau ordinaire, il est clair que le globe vitellin, pourvu de son pronucleus, n'est pas une cellule. Si une dénomination spéciale est justifiée pour l'élément nucléaire elle l'est aussi pour le corps cellulaire. C'est pourquoi je propose de désigner, sous le nom de gonocyte femelle, le globe vitellin pourvu de son pronucleus.
Quant au spermatozoïde, il se distingue de tout élément cellulaire proprement dit par bien des caractères; jamais on n observe de division d'un zoosperme. ”

“ Cependant, dès que le spermatozoïde est complètement entré, la plus grande partie du noyau de l'œuf se transforme en une substance finement ponctuée et fibrillaire; la membrane de la vésicule disparait et l'on ne distingue plus de l'ancien noyau de l'œuf qu'une tache claire et incolore, dans laquelle se détache un élément vivement coloré en rouge et dont la forme et la constitution seront décrits plus loin (pl. XIII, fig: 80 et 81) . Tandis que le zoosperme gagne le centre du vitellus, la vésicule germinative transformée se porte à la surface. ”

“ Si les cellules des tissus sont hermaphrodites, les œufs doivent être dans le même cas; ils sont de par toute leur histoire et surtout de par leur origine de simples cellules. Le caractère sexuel femelle de l'œuf prend naissance seulement après l'expulsion des globules polaires; dans la fécondation les éléments mâles de l'œuf sont remplacés par des éléments nouveaux apportés par le zoosperme.
Il y a longtemps déjà que j'ai exprimé l'idée qu'il faut
rattacher le phénomène du retrait à l'élimination des globules polaires. ”

“ Le plus souvent les zoospermes copulés avec l'œuf, ceux qui ont pénétré à l'intérieur du vitellus, appartiennent au type conoïde et se reconnaissent immédiatement à la présence dans leur portion caudale du grand corps réfringent que nous avons décrit. Mais fréquemment aussi la fécondation s'accomplit par un spermatozoïde campanuliforme ou même pyriforme et la pénétration s'accomplit de la même manière, quelque soit le stade auquel le zoosperme est arrivé, au moment où il entre en copulation avec l'œuf. ”