H. Kufferath

“ Une autre erreur à éviter est celle de croire qu'on ne puisse obtenir de cultures pures d'algues qu'en supprimant certains corps organiques. Ces subtances organiques sont décomposées par les bactéries, aussi s'efforçat-on de les supprimer pour réussir. Tout cela est sans pertinence et indique plutôt un manque de technique appropriée. On ne voit réellement pas ce que de telles raisons prêchent en faveur ou contre la culture pure ! ”

“ Mais ce que l'on doit éviter, et ce qui ne le fut malheureusement pas toujours, c'est de vouloir présenter comme définitifs des résultats aussi incertains et précaires, toujours discutables tels que ceux obtenus avec des cultures unialgales. Et ce n'est pas diminuer la culture pure que de laisser la place à des techniques imparfaites, qui ne sont en somme qu'un stade de notre pénible ascension vers la perfection. ”

“ Le desideratum à remplir pour réaliser une culture pure est que tous les individus dérivent d'une seule cellule mère, donc forment un rameau pur (Clone) et une race physiologique unique. Les cultures d'algues de KLEBS et de ses élèves remplissent ces conditions, du moins en ce qui concerne les algues. Mais les bactéries et même les champignons n'étaient pas exclus. Vu que ces organismes ne peuvent être confondus avec des algues, il ne peuvent amener des fautes dans les questions de variabilité des algues, mais ils prohibent l'emploi de toute matière organique. ”

“ On sait qu'en bactériologie, l'isolement des germes pathogènes se fait avec grande facilité et rapidement, grâce à l'emploi de milieux de culture spéciaux et adéquats au but poursuivi. C'est ainsi que le bacille diphtérique s'isole en quelques heures sur sérum coagulé, le choléra par l'eau peptonce, la séparation des microbes de l'intestin : colibacille, bacilles typhique, dysentérique, etc., est rapide sur les milieux de Drigalsky, d'Eudo, etc., le Bacille tuberculeux s'isole bien sur le milieu de Petroff et d'autres analogues à base d'œufs additionnés de colorants. ”

“ Multiplier les algues dans une infusion, les obtenir en masse, c'est pour le botaniste les cultiver. Isoler une cellule verte dans ces
infusions au moyen d'une pipette, en obtenir la prolifération, c'est réaliser une culture pure. KLEBS (1896) dans un ouvrage célèbre réalisa quelques cultures de ce genre. Il lui suffisait d'avoir dans ses milieux une algue d'une seule espèce, peu importe qu'elle soit accompagnée de bactéries, moisissures ou même d'organismes animaux, pour considérer qu'il avait une culture pure. ”

“ Des algues vivent et prospèrent dans le sol. Qui dit que les faibles doses des corps cités ci-dessus n'agissent pas sur elles comme elles le font sur les bactéries ? On le voit, l'argument qui consiste en somme à dire que les algues trouvent dans les expériences de laboratoire, dans les milieux créés pour éprouver leur biologie et observer leurs réactions morphologiques et culturales, des conditions que l'on ne rencontre pas dans la nature, est un argument qui ne résiste pas à une analyse un peu serrée. ”

“ Comme bien l'on pense, l'affirmation de la nécessité de la pureté des cultures d'algues, non seulement pour les recherches physiologiques où elle est difficilement contestable et incontestée, mais pour des recherches de pure morphologie, de biologie a soulevé de la part des adversaires de la culture rigoureusement pure, des objections. On a même été jusqu'à faire des reproches aux cultures pures. ”

“ Il suffirait par exemple d'obtenir ce Scenedesmus très remarquable dans deux cultures pures, l'une formant sur gelose des disqus verts, l'autre des colonies rouges, pour devoir les distinguer entre elles par une étiquette spécifique ou de variété pour le moins.
La technique des cultures pures n'en est qu'à ses débuts ; elle offre des ressources inépuisables et l'on ne peut raisonnablement argumenter du fait qu'on n'a pu dans tous les cas en tirer le parti le meilleur. ”

“ Incontestablement, l'étude des cultures d'Algues, leur nutrition sont du domaine de la physiologie botanique. Pour ces organismes les échanges de matière se présentent dans des conditions particulières très favorables à l'étude. Les Algues sont des organismes simples : généralement unicellulaires, vivant dans l'eau ou en milieu humide, sans tissus de conduction semblables à ceux qui véhiculent la sève chez les Phanérogames. Simplicité cellulaire, croissance rapide, sensibilité réactionnelle parfaite, sont des éléments qui attirent l'attention du physiologiste. ”

“ Les botanistes algologistes ont de tout temps mis en œuvre la méthode des cultures pour arriver à se rendre compte de l'évolution et du développement des algues. Depuis que l'on étudie les algues au microscope, on s'est aperçu qu'il suffit d'abandonner à eux-mêmes des matériaux récoltés dans la nature, de les vivifier en leur fournissant, avec l'eau nécessaire, divers sels nutritifs organiques ou inorganiques pour obtenir une multiplication plus ou moins abondante d'organismes monocellulaires à chromophylle. ”

“ Il est clair que l'étude des phénomènes qui se passent dans le sol n'est qu'à son début, le peu qu'on en sait montre les surprises qu'il faut en attendre. Mais, il est incontestable que l'on ne peut plus considérer les éléments du sol, que l'on se représentait volontiers autrefois comme un support inerte, comme des éléments indifférents. Le rôle de tampon que jouent la silice, l'argile indique bien que dans les cultures d'Algues où l'on fait intervenir des matières colloïdales terreuses, on ne peut
pas se contenter de ne considérer que les éléments solubles ajoutes aux liquides. ”

“ Pour des études physiologiques, l'aspect morphologique coloniaire n'a pas grande importance, spécialement lorsqu'il s'agit d'apprécier l'avantage de tel ou tel élément nutritif pour les Algues. Dans ce cas, il s'agit d'évaluer l'abondance des cultures, cette appréciation peut se faire de diverses façons, d'abord dans les cas où une précision parfaite n'est pas requise et où il suffit de noter s'il n'y a pas ou s'il y a culture, tout en disant que cette culture est faible, moyenne-, forte ou très forte. ”

“ Nous avons pu obtenir en culture pure toute une série d'Algues : Porphyridium et diverses Chlorophycées citées dans nos travaux (1920 a, b, c) . Ces cultures ont été envoyées au professeur R. CHODAT qui a bien voulu les conserver et s'assurer de leur pureté.
Au cours de nos recherches physiologiques sur la nutrition des Algues au moyen des corps organiques, nous avons constaté que toute une série (principalement des sels d'acides gras) de corps sans être des aliments de premier choix permettent pourtant pour des Algues très variées un développement notable à la lumière. ”

“ Lorsque les spores ou gamètes doivent, avant de donner lieu à de nouvelles générations, passer par des stades intermédiaires, (formation, de zygotes par exemple) et que l'on ne réalise pas en culture les conditions de la formation de ces organes. On peut voir disparaître une culture jusque là florissante. Il faut évidemment être au courant de la biologie des organismes pour pouvoir les maintenir dans leur activité vitale complète. ”

“ La technique des cultures est en effet ardue et difficile. En fait, si l'on élimine tous les résultats douteux, les cultures uniagales, et que l'on ne considère que les cultures pures, on trouvera que le champ d'investigation n'est pas très grand comparativement au nombre d'Algues unicellulaires connues Parmi les Algues obtenues en culture pure par divers chercheurs, nous trouvons surtout les genres Chlorella, Palmellococcus. ”

“ On sait que, si lors de l'ensemencement de germes déposés sur plaques de verre, on attend trop longtemps avant de les mélanger à la gélatine ou la gélose, on n'obtient pas un éparpillement égal des microbes dans le milieu. On constate que l'endroit où l'on a déposé la goutte est fort chargé de germes. ”

“ L'étude de la nature est la source toujours nouvelle de nos recherches. Le tout est de pouvoir l'interroger. Nous possédons pour cela des moyens variés dépendant de la chimie, de la physique, de la physico-chimie, sans compter les techniques biologiques. Cet arsenal d'étude augmente -chaque jour et à chaque pas nourveau de plus grands horizons s'entr'ouvrent. C'est par ces méthodes que l'on parviendra à mieux connaître le milieu dans ses caractéristiques. ”

“ En effet, la plupart des travaux algologiques reposent sur l'étude d'échantillons pris dans la nature . (quand ce n'est pas d'après des préparations d'herbiers !) et cultivés dans des conditions plus ou moins parfaites au laboratoire. Dans les mélanges d'algues, de bactéries, d'animaux variés, le botaniste s'efforce de suivre le cycle vital d'une algue. Il suffit de remonter quelque peu dans l'histoire de l'algologie pour trouver les choses les plus effarantes. ”

“ Il suffit de jeter un coup d'œil sur la variété des habitats des Algues pour comprendre que le travailleur de laboratoire, s'il veut réussir des isolements, doit s'inspirer de ce qui se passe dans la nature et modifier en conséquence ses procédés de culture, les milieux qu'il entend employer. ”

“ Après refroidissement, on verse sur la terre du liquide nutritif stérile de façon que ce liquide arrive par imbibation audessus de la couche de craie des petits tubes. Dans cet aquarium crayeux, on ensemence des cultures d'enrichissement d'Eudorina, Pandorina et de Gonium. On recouvre le tout d'une cloche non hermétique de manière à ce que l'eau s'évapore très lentement. Les Algues se trouvent ainsi petit à petit dans un milieu de plus en plus sec et forment des états de résistance, des masses glœocystiques ou palmelloïdes avec des cellules entourées de gelée. ”

“ A la gélose, à base de liquide nutritif, on ajoute des corps organiques assimilables par les Algues mais peu nutritifs pour les microbes. Parmi ces corps citons : les formiates, l'oxalate de chaux, le citrate de calciumi, le malate de calcium, etc.
qui, à des concentrations de 0,5 à 1 p. 100, entravent le développement microbien tout en étant assez bons pour les Algues. En variant les milieux lors des repiquages, on parvient au bout de très peu de temps à obtenir des cultures pures. ”

“ On sait que la gélose à 1.5 ou 2 p. 100 forme des milieux consistants, il y aurait peut-être avantage à utiliser de la gélose plus molle par exemple à 0.5 p. 100 pour la culture d'organismes moins
robustes que ceux que l'on obtient généralement en culture. Mais la grande difficulté dans l'emploi de tels milieux est l'ensemencement, le milieu trop mou est facilement abimé par simple frottis superficiel et aussi dans ces masses migclifiécs les bactéries se propagent beaucoup plus vite. On ne peut conseiller d'expériences en ce sens qu'à ceux qui sont absolument sûrs de leur technique. ”

“ Le passage des cultures d'Algues à isoler, Algues toujours accompagnées de bactéries dans la nature, sur des milieux renfermant chaque fois des sels organiques différents, exerce certainement une action sur les microbes associés aux Algues. Lorsque, comme ce fut le cas, l'Algue parvient à vivre sur les divers milieux différentiels, les bactéries sont influencées. Si certaines espèces sont favorisées, d'autres sont anéanties et, par passage dans des milieux chaque fois différents, on arrive à les éliminer. ”

“ Parmi les substances complexes offertes aux Protistes comme aliments on peut citer les microbes ou levures utilisés dans les cultures mixtes.
On voit que petit à petit en étendant les cultures à diverses Algues et aux Protistes, on est arrivé à composer des milieux de plus en plus variés, basés néanmoins sur les liquides nutritifs inorganiques classiques. L'évolution des milieux de culture est donc marquée par la multiplicité des éléments nouveaux utilisés. ”

“ La nutrition par les corps organiques a été la plus étudiée — au contraire, et cela semble paradoxal, l'assimilation des substances inorganiques par les algues n'est pas basée sur l'étude de cultures pures. Tous les travaux fondamentaux sur ce suj et ont été exécutés avec des cultures unialgales.
Il est à remarquer que le nombre d'espèces d'algues isolées en culture pure n'appartiennent qu'à un très petit nombre de genres ; citons parmi les principaux : Chlorella, Scenedesmus, Ooc-ystis, Hormidium, Stichococcus et parmi les Volvocacées Chlamydomonas. ”

“ Il nous semble peu logique d'admettre en compagnie des cultures pures, et même des cultures unialgales, des accumulations plus ou moins impures d'algues, même si ces masses doivent servir à des triages et n'être que des étapes pour l'isolement définitif.
Il est évident que l'algologie expérimentale par cultures suivra un développement comparable à celui de la bactériologie. Pendant toute la période des débuts bactériologiques on n'employa que les milieux au bouillon de viande, on réussit par ce moyen l'isolement
d'un grand nombre de germes. ”

“ Pour les Algues qui supportent une certaine dessication, on utilisera par exemple de l'amidon servant à l'apprêt du linge. Ce produit est formé le plus souvent de grains de maïs ou de riz, il est pur et se laisse stériliser sans difficulté. On laisse tomber sur l'amidon préparé une goutte de liquide algifère, l'eau et les microbes sont immédiatement absorbés, on isolera les Algues que l'on peut facilement distinguer sur ce milieu. Par passages successifs, on arrive à en purifier.
Non seulement des substances absorbantes pourront être utilisées
mais aussi des lamelles de verre. ”