Gélose

“ En piqûre, dans les tubes, la gélatine seliquétie lentement, et les filaments se développent en grosses masses floconneuses ; il en est de même dans le bonillon. Sur gélose à 35°, on obtient une pellicule épaisse, luisante, adhérente au substratum. Les colonies présentent des cercles concentriques avec des plis convergeant vers le centre, qui leur donne un aspect radié caractéristique.
(2) Au lieu de liquide, on peut remplir la cellule d'un substratum solide (gélatine ou gélose nutritive) , très favorable pour le développement des Bactériacées. ”

“ Sur les plaques de gélatine, il se forme au bout de deux jours des colonies blanches irrégulières, non liquéfiantes: sur la gélose, croissance rapide comme des taches circulaires grisâtres.
Les cultures par piqûre sur gélose envahissent rapidement - toute la surface comme un enduit d'un gris uniforme ; croissance plus faible le long du trait de l'inoculation.
Les cultures ne liquéfient pas la gélatine ”

“ Culture sur gélose nutritive. La proportion d'agar-agar est à peu près la même que celle déjà signalée pour nos cultures de B. Balbianii, soit 2 %.
C'est dans les tubes à essais que l'aspect des cultures est le plus caractéristique. Si, de même que pour la gélatine, on ensemence la surface de la gélose à l'aide de colonies obtenues sur plaques, on remarque, à la température de + 30°C et au début du cinquième jour, que la masse totale est devenue un peu trouble et d'une belle teinte fluorescente vert émeraude (1) . ”

“ Sur plaque gélatine, il forme des colonies d'un rouge vineux et ne la liquéfie pas. En gélatine piquée, il se développe le long de la piqûre sous forme de nodosités sphériques. Sur gélose, il produit une culture pâle grisâtre qui se teinte plus tard d'un teint rose. Sur pomme de terre, le développement se fait lentement. ”

“ Une fois la liquéfaction commencée, la fonte de la gélatine devient très rapide.
A la surface de la gélose laissée entre 56 et 58 degrés, la culture se fait rapidement et prend bientôt une coloration brunâtre.
La culture en bouillon donne au milieu une teinte jaunâtre que prend la pellicule épaisse et difficile à dissocier qui se forme à la surface du liquide. Dans un bouillon acidifié au 1/2000e par l'acide chlorhydrique, la culture se fait très bien et pendant des générations successives. ”

“ La méthode employée pour la recherche de la gélos par le Laboratoire municipal de Paris est la suivante : On soumet à la dialyse 100 grammes de confitures; les substances qui restent sur la membrane du dialyseur sont filtrées, ce qui permet d'isoler la gélose insoluble; le filtre et son contenu sont brûlés au moyen d'un mélange de 1 partie d'acide sulfurique et de 3 parties d'acide nitrique ; lorsque l'attaque est terminée, on étend d'eau, et on laisse reposer pendant vingt-quatre heures; on décante doucement et l'on examine le résidu au microscope. ”

“ Mettre la gélose coupée dans un petit nouet de gaze, laver abondamment, puis dissoudre dans l'eau portée à l'ébullition, évaporer jusqu'à ce que le poids total de la solution soit de 30 grammes, ajouter alors les 70 grammes de glycérine préalablement chauffée.
On peut stériliser ce mélange à l'autoclave. Pour incorporer le médicament insoluble ou soluble, attendre que la masse soit vers 40° ou 45° (fortement tiède) , ajouter le composé, agiter avec soin avec un agitateur et couler dans des moules enduits d'huile de vaseline. ”

“ Sur gélatine, qu'il liquéfie lentement, il prolifère en émettant un colorant d'un beau rouge comme sur gelose et sur pomme de terre. La température de chambre lui est le plus favorable. A l'étuve il ne prolifère pas. ”

“ Si la gélose par elle-même n'est pas alimentaire, il ressort des recherches récentes que, grâce à ses propriétés d'absorption, elle doit jouer un rôle important comme véhicule, comme réserve des substances salines et autres qui lui sont adj ointes lors de la confection des milieux de culture. ”

“ La liquéfaction de la gélatine, longue à apparaître, est au contraire des plus nettes, c'est la culture la plus caractéristique ; la masse floconneuse qui occupe le fond de la gélatine liquéfiée prend une vague teinte de rouille. Le bacille ne cultive pas sur pomme de terre. Sur gélose, l'on obtient une traînée blanchâtre, festonnée sur les bords, « teenioïde ». ”

“ Le 24 seulement la gélatine est ramollie sans être toutefois liquéfiée ; la colonieest intacte.
Strie de gélatine : Culture du 4 juin donne le 5 l’aspect que nous avons rapporté plus haut. Gélose : L’expérience de culture du 18 est complètement développée le 21. Bouillon : L’expérience de culture du 4 juin ; le 5 juin, un voile épais et plissé; le 6 un dépôt assez épais; le bouillon s’est éclairci.
Nous avons trouvé ce Proteus dans presque toutes nos expériences, surtout dans celles que nous avons faites avec du sable mouillé. ”

“ On en obtient facilement des cultures en tubes, dans la gélatine ou la gélose, en ensemençant, par une piqûre profonde la gelée qui a été bouillie pour la priver d'air, puis mise à refroidir. Des colonies se développent dans les couches profondes (fig. 60, Gt, 02) , ou même dans les parties superficielles, si l'on a pris soin de remplir le tube d'un gaz inerte ou de recouvrir la surface de la gelée, d'une couche d'huile bouillie pour empêcher la diffusion de l'air dans la gelée.
Les cultures dans le bouillon s'obtiennent très facilement en
présence d'un gaz inerte ”

“ Les plaques, recouvertes de gélose, sont toujours asséchées par un séjour d'une demi-heure à l'air libre. Les germes de l'air ne cultivent que tardivement (cinq àsix jours) sur ce milieu très nutritif, mais légèrement antiseptique.
v. Drigalski et Conradi ensemencent les plaques à l'aide d'une baguette en verre de 5 millimètres d'épaisseur, recourbée à angle droit à une extrémité. Au moyen de cette baguette, ils étalent la matière à examiner (1 à 2 centimètres cubes d'eau ou précipité recueilli par centrifugation) à la surface des plaques. En frictionnant la gélose dans tous les sens. ”

“ Peptone, 10 grammes; Sel marin, 5 grammes; Gélatine, 20 grammes; Eau distillée, Q. S. pour 100 centimètres cubes; Alcaliniser à la soude.
100 centimètres cubes de l'eau suspecte sont additionnés de 10 centimètres cubes de ce liquide pais placés à l'étuve à 35°. Au bout de 12 heures, on ensemence avec le voile, formé à la surface de la culture ou avec la partie superficielle du liquide, s'il n'y a pas de voile, des plaques de gélose nutritive qui sont placées à l'étuve à 35°. Dès que les colonies apparaissent, on procède à leur examen microscopique. ”

“ Gélose glycérinée. — Même aspect, colonies luxuriantes, teinte brune, plus tardive et moins foncée. Par ses repiquages, le Sporotrichum perd même son pigment sur ce milieu.
Gélatine. — Développement très lent, colonies larges, blanches. En piqûre, arborisations horizontales : aspect de sapin renversé. Pas de liquéfaction. Mais le champignon pousse à vrai dire fort mal. Gougerot a montré que, sur gélatine glucosée, peptonée, où il. pousse bien, la gélatine est liquéfiée.
Sérum humain, bile de boeuf, urine normale. — Culture
maigre ; pousse bien par contre dans l'urine de diabétique. ”

“ Diviser en pots ou conserver à la cave, dans un bocal à l'émeri.
Nota. — La gélatine a l'avantage de rendre la crème plus ferme et d'éviter qu'elle abandonne de l'eau, ce qui se produit parfois lorsque la saponification se fait mal. Quoi qu'il en soit, nous préférons la remplacer par une dose de 4 grammes de gélose dissoute dans les 450 grammes d'eau de rose, ou mieux encore par 1 gr. d'amidon pour 100 gr. de glycérine. ”

“ On procède ensuite à l'ensemencement de chaque colonie initiale, prise sur plaque, sur une série de milieux nutritifs dont les principaux sont d'ordinaire : le bouillon peptonisé de Lœffler, la gélose, le sérum sanguin, la gélatine peptone, en piqûre et en strie (fig. 32 et 33) la pomme de terre, auxquels on peut adjoindre dans certains cas particuliers : l'urine, le lait, les substrata liquides ou solides faits avec le touraillon (résidu de l'orge germé) etc., etc. ”

“ Dans les bouillons il détermine une pellicule blanchâtre; il pousse également dans le lait qu'il ne coagule pas. La culture sur gélose n'a rien de caractéristique, il se forme un enduit épais, grisâtre; sur la pomme de terre; on obtient une culture de couleur brune rappelant un peu celle de la morve. Les cultures les plus caractéristiques sont celles que l'on fait sur gélatine, soit par piqûre, soit en plaque. En piqûre, la gélatine se déprime à la partie supé¬ ”

“ Les eaux de levure, de malt, de touraillons, et les infusions végétales diverses peuvent être obtenues par un procédé analogue.
Les milieux solides, le plus communément employés, sont: la gélatine, la gélose, le sérum solidifié, les pommes de terre, etc.
La gélatine peptonisée est le type de la gélatine de culture; on la prépare de la façon suivante : faire macérer, pendant vingt-quatre heures, au frais, 1 livre de viande hachée, dansi litre d'eau distillée; passer à travers un linge humecté
d'eau distillée, et exprimer ”

“ A.défaut de gélose, on utilise également la gomme adragante à la même dose.
2. Crème au Glycéré d'Amidon :
Même composition et même mode opératoire que pour la crème cirdessus, seulement on remplacera le parfum D par 1 gramme p. 100 d'héliotropine et on ajoutera, lorsqu'on fera le glycéré, 0,50p. 100 de gélatine dissoute dans 4 à 5 grammes d'eau de rose. Diviser en pots de 30 centimètres cubes.
CRÈME ANALOGUE A LA CRÈME LORIS GLYCÉRINÉE AU SUC DE LYS
Nota. — L'emploi de la gélatine est inutile lorsqu'on se sert d'amidon de blé pur. ”

“ Milieux solides ou demi-solides. — Si, aux bouillons précédents chauds, ou à du sérum tiède, on ajoute de la gélatine ou de la gélose, on obtient par le refroidissement un milieu solide. On emploie encore des tranches de pommes de terre, de carottes, des fruits, des oeufs coupés en deux, etc., etc.
Le bouillon à la gélatine se prépare ainsi : on porte du bouillon de viande au voisinage de l'ébullition ; on le retire du feu et on y tait dissoudre 10 0/0 do gélatine en feuilles de bonne qualité. ”

“ Lait tournesolé. — La coagulation avec" très légère acidification se produit seulement le troisième jour à 37°. é.
Gélose (Fig. II, 1, 2, 3) . — En strie sur gélose inclinée, la culture a 37° p sente l'aspect d'un enduit transparent, peu épais, blanchâtre par réflexIOn,
FlG. II. — Aspect des colonies.
Milieu de culture : 1, Gélose sèche. — 2, Gélose humide. — 3, Gélose sèche. -4 et 5, Gélatine. ”

“ On prépare quelquefois des gelées médicamenteuses avec des substances qui ne contiennent pas de gélatine; et alors on est obligé d'associer à ces substances, un corps qui puisse fournir de la gélatine; ou bien on ajoute à de la gélatine extraite d'un corps, le suc, la teinture ouïe bouillon de la substance qui doit donner la propriété et le nom à la gelée; c'est ainsi qu'on prépare les gelées d'oranges, de citrons, de choux rouge, de quinquina, etc. ”

“ La gélatine est une substance demi-transparente, incolore, inodore, insipide ; sa densité est plus considérable que celle de l'eau ; sa duretée et sa consistance sont variables. La gélatine, principe immédiat des animaux, que l'on retire de la peau, des muscles, des ligaments, des tendons, des os, etc., est composée d'oxygène, d'hydrogène, de carbone et d'azote. L'air ne l'altère point lorsqu'elle est à l'état solide, mais à celui de liquide ou de gelée elle s'aigrit rapidement et se pourrit. L'eau chaude la dissout bien mieux que l'eau froide. ”

“ La gélatine a été considérée comme la matière organique qui réussit le mieux. On fait dissoudre dans un litre d'eau pure de 50 à 60 grammes de gélatine ; on colore cette solution à l'aide d'une quantité suffisante de noir de charbon ou de toute autre couleur inerte. La dissolution étant
placée dans une cuvette que l'on maintient tiède au bain-marie, on applique à sa surface chaque feuille d'un seul côté seulement. ”

“ La gélatine (colle ou glutine) et la substance collagène, sa génératrice, sont composées de carbone, hydrogène, oxygène, azote et soufre. Comme les substances albumineuses, elles donnent, sous l'influence des acides ou des alcalis à l'ébullition, ou par la putréfaction, différents produits de décomposition, parmi lesquels il convient de signaler l'eau, l'ammoniaque, le gaz carbonique et des amino-acides, glycocolle, alanine, leucine, acides aspartique et glutamique, valine, sérine, phénylalanine, etc. ; — mais on n'y trouve ni tyrosine ni tryplophane. ”

“ Pousse sur agar, gélatine et pomme de terre. Optimum à 34, mais pousse aussi plus bas, en anaérobie et aérobie. Mobile, cils péritriches. Prend le Gram. Les jeunes cultures sur gélatine montrent des. figures comme B. Zopfii; à la surface du godet de liquéfaction, apparaît une pellicule sèche. Belles ramifications, rappelant le mycoïdes dans l'agar en piqûre. Dans le bouillon, trouble, et mince pellicule grise, dépôt filamenteux; lait coagulé et peptonisé. Produit de l'indol, de l'H2S et NH 3, réduit les nitrates en nitrites. ”

“ La gélatine est une substance amorphe, incolore, transparente ; insoluble dans l'eau froide, l'alcool, l'éther, le chloroforme, etc.; soluble dans l'eau et la glycérine chaudes ; cette solution dans l'eau chaude, visqueuse et filante, se prend en gelée par le refroidissement (gélificalion) . Les solutions de gélatine ne dialysent pas; ce sont des colloïdes; elles ne coagulent pas par la chaleur; elles donnent la réaction du biuret, mais non celle de Millon (due à la présence de la tyrosine dans la molécule protéique) ni la réaction xanthoprotéique. ”