Agar

“ Pour ensemencer l'agar-agar, on retourne l'appareil de façon à ce que la surface de l'agar-agar soit retournée par en bas, on l'inocule suivant un premier grand cercle avec le fil de platine chargé de la substance à ensemencer. On referme le cristallisoir et on l'expose à la température nécessitée par les bactéries inoculées. On peut observer, à travers le verre, les progrès du développement avec une faible lentille, sous le microscope. La culture pousse en faisant un cercle complet et très net. On la laisse ainsi pendant huit jours, quinze jours ou un mois. ”

“ A un grossissement de go diam., on remarque que le voile délicat qui entoure les colonies superficielles est constitué par une couche très mince de bactéries [38, VI] .
Agar en piqûre. — Semblable à la culture sur gélatine [37, IV] .
Agar en strie.— Culture extraordinairement délicate, gris blanchâtre, transparente, brillante. Dans le milieu, il y a quelquefois une bande plus claire. Au bout de peu de temps, toute la surface est recouverte, les filaments chevelus ne sont plus guère visibles; masse zoogléique [37, I] . La culture est plus riche vers la profondeur [37, II] . ”

“ Culture moyennement intense sur agar et particulièrement sur sérum-agar, mauvaise sur gélatine et pomme de terre. Production intense d'acide dans le bouillon. Habituellement des corpuscules de Neisser colorables dans les bâtonnets. Pathogène pour l'homme et les animaux. ”

“ Avantages : utilisable à la température de l'étuve c'est-à-dire que la culture rapide des. Bactéries (spores bactériennes et particulièrement pour les bactéries thermophiles et pathogènes) . Favorise la production du pigment. Inconvénients: fabrication un peu moins facile, difficulté du coulage en plaques (l'agar, qui fond à 95°, doit être refroidie à 40°, avant qu'on l'ensemence) . Les cultures sont souvent peu caractéristiques.
2. Sérum sanguin, agar glycériné et agar-ascite glycérinées — Pour la culture des espèces pathogènes qui ne poussent pas ou poussent mal sur les autres milieux. ”

“ Réaction et composition du milieu de culture. — Culture bonne et riche seulement à la température de l'étuve. Optimum entre 33 et 37°. Températures extrêmes 18 à 20, et 40°. Agar glycérinée mieux que l'agar ordinaire, favorise la croissance, mais bien meilleurs encore sont le sérum ou les milieux au liquide d'ascite. Le milieu de choix est le milieu bouillon sucré — sérum sanguin de Loeffler (sérum de Loeffler) . ”

“ Agar en piqûre. — A la partie supérieure, la colonie
est d'abord assez humide, brillante et jaunâtre, saillante
en forme de tête de clou; plus tard, elle devient sèche,
dense, et un peu plissée. L'agar se colore fortement en
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brun. Autour de la piqûre, on voit des branches rayonnées en forme de soies raides [73, III, IV] .
Agar en strie. — La culture s'étend modérément au delà des limites de la strie; elle présente une coloration brune, et aux endroits minces de l'agar un bord blanchâtre, crayeux ”

“ Sur l'agar-agar, ils forment des petites colonies rondes,, plates, à peine colorées, transparentes, confluentes disposées en une couche fine, granuleuse, à la surface de la substance nutritive. Sur gélatine recouverte de gélatine, l'aspect de la culture est le même, mais on constate encore que dans la profondeur de la substance, la strie fine de la culture est entourée d'un nuage peu distinct qui contient aussi des touffes de bacilles. Ce microbe n'est pathogène que dans ses premières cultures pour le lapin et la souris, il ne produit pas d'endocardite chez ces animaux. ”

“ Les cultures réussissent aussi très bien sur l'agar-agar, à 1 ou 2 p. 100, qui a l'avantage de pouvoir être chauffé à la température de 37° et sur laquelle les bacilles se développent très rapidement, en dix heures. ”

“ Il est important de bien laisser dissoudre et de bien laisser gonfler l'agar chaque fois qu'on prépare de la gélose, parce qu'on évite ainsi de laisser brûler l'agar et de la faire devenir brune. La neutralisation se fait comme pour le bouillon.
Par ce moyen extrêmement pratique on peut obtenir de l'agar, absolument claire ou très peu trouble ; toutes les améliorations conseillées n'ont que des inconvénients, qui ne servent qu'à fausser la fabrication ou à tromper l'expérimentateur. ”

“ La figure 44 représente une culture sur agar. Les bâtonnets courts et épais sont presque sans exception réunis par groupes de deux ou trois et apparaissent plutôt comme un long bâton. Les pôles sont arrondis. Issus directement de l'organisme, ils sont entourés d'une capsule. Ils sont d'une mobilité vive et ne sporulent pas. Sur gélatine, ils se développent sans liquéfier son terrain; ils forment une couche gris clair. Sur agar et sérum, ils prospèrent à l'étuve.
Les cultures pures sont très virulentes pour les souris, cobayes et lapins qui meurent au bout de quelques jours. ”

“ Le passage par l'animal ne modifie pas du tout le pouvoir hémolytique. La virulence semble être indépendante de ce pouvoir.
Méthodes spéciales de culture et diagnostic. — Lorsque les coli bacilles sont très abondants (matières fécales) les plaques d'agar à 37° se recommandent pour les isoler.
Au bout de 24 heures, les nombreuses colonies sont transportées sur des milieux à l'agar liquéfiée par la chaleur contenant 2 o/o de glucose; on agite cette agar sucrée et on laisse la solidification se produire. ”

“ Pousse sur agar, gélatine et pomme de terre. Optimum à 34, mais pousse aussi plus bas, en anaérobie et aérobie. Mobile, cils péritriches. Prend le Gram. Les jeunes cultures sur gélatine montrent des. figures comme B. Zopfii; à la surface du godet de liquéfaction, apparaît une pellicule sèche. Belles ramifications, rappelant le mycoïdes dans l'agar en piqûre. Dans le bouillon, trouble, et mince pellicule grise, dépôt filamenteux; lait coagulé et peptonisé. Produit de l'indol, de l'H2S et NH 3, réduit les nitrates en nitrites. ”

“ Il est important d'agir rapidement, car dans un milieu liquide comme le bouillon, le rapport des espèces change très vite. Certaines espèces se développent avec une extrême rapidité; d'autres au contraire, comme certaines espèces anaérobies, meurent rapidement dans ce bouillon acre.
La gélose semble être le milieu de choix pour les différentes cultures des microbes aérobies du tube digestif.
Cependant sur l'agar peptonisé et salé, ou agar ordinaire, toutes les espèces ne poussent pas; aussi recommande-t-il d'y joindre une substance nutritive telle que la glucose, à la dose de 1,5 p, 100. ”

“ C'est de l'agar à 3 0/0, avec 1 0/0 de lactose, à laquelle on ajoute 0,6 de soude hydratée et 0,8 d'alizarine (Kahlbaum) que l'on a fait dissoudre à l'ébullition dans 100 cmc. d'eau. Le milieu doit être alcalinisé par 5 à 7 cmc. de soude au 1/10 pour 100 cmc. Puis on ajoute pour 100 d'agar, 1,7 cmc. d'une solution de vert malachite à 0,1 0/0, qui entrave la culture du coli. Le milieu est bleu foncé. Le coli le colore en jaune en l'éclaircissant ; le typhus donne des colonies gris-bleu, de même que le paratyphus et l'entéritidis. ”

“ On le cultive sur la gélatine peptonisée, l'agar-agar et la pomme de terre; son développement y est déjà sensible à 4°, la meilleure température pour lui est 25 à 35°; à 46° la culture s'arrête ; sa vitalité est très longue, des cultures ont pu rester fertiles après six mois; il supporte une dessiccation prolongée, ce qui est dû à la présence des spores; il résiste aussi facilement à la congélation; le sublimé, la quinine, les acides phénique et chlorhydrique le chlorure de chaux sont les substances qui s'opposent à la culture de ce bacille ”

“ Lorsque la matière est très impure, il faut essayer de cultiver le bacille pesteux sur gélatine à basse température (glacière) . Ces cultures seront utilisées pour des réensemencements sur agar ou sur sérum de Lôffler, et les microbes obtenus après celte purification seront soumis à des essais d'identité : Immobilité ; décoloration par la méthode de Gram ; culture sur agar additionné de 3 p. 100 de chlorure sodique (formes d'involution) ; culture en bouillon faiblement alcalin (chaînettes) ; essai de fermentation: pas de formation de gaz; essai sur les animaux; essai d'agglutination. ”

“ Examinées au microscope, ses cellules sont ordinairement plus petites que celles du staphylococcus aureus. Sur les plaques de gélatine, sa culture, incolore, se présente sous la forme d'une cellule munie de son noyau. Sur l'agar-agar elle donne une couche mince qui devient jaune au bout de huit jours et seulement dans sa profondeur en liquéfiant la gélatine. La surface de la culture présente une couche blanche épaisse. ”

“ Le microbe est anaérobie strict, il pousse le mieux dans l'ascite agar sucrée. Les cultures correspondent complètement à celles du bouillon anaérobie ; elles présentent des franges et des prolongements en bouquets, au bout de quelques jours. Les colonies superficielles, — à l'abri de l'oxygène, — sont grisâtres, plus ou moins régulières. Dans le Bouillon, sérum, on obtient de longs filaments. Audessous de 17°, pas de culture. ”

“ Si l'on prend une plus grande dose de corps microbiens, l'action du sérum est beaucoup plus faible. Pour obtenir des cultures faciles à triturer, on fait la culture sur de l'agar que l'on a laissée un peu dessécher à l'étuve, 24 heures auparavant. ”

“ Culture sur agar : gris, jaune clair sale, assez élargie; l'eau de condensation est claire avec dépôt modéré. Bouillon légèrement troublé, avec dépôt modéré et pellicule légère; beaucoup d'indol et d'H2S. Lait non coagulé, mais un peu glaireux; pas de gaz avec la glucose. Pomme de terre jaunâtre.
Un microbe isolé par nous de l'estomac correspond en tout point au B. de Zimmermann. ”

“ Agar en strie. — La culture reste limitée à la strie, le bord est uni, ordinairement ondulé. Coloration gris blanchâtre, un peu de transparence sur les bords. La colonie dans son entier fait l'impression d'une infinité de bulles d'air minuscules brillantes comme de l'argent, situées audessous de la surface. ”

“ Il est bon de laisser gélatiniser obliquement l'agar-agar afin de pouvoir faire l'ensemencement à la fois par une piqûre et par une strie. Les cultures sont ainsi très démonstratives.
Le meilleur milieu de culture pour les bactéries pathogènes est le sérum du sang du boeuf, du mouton et du cheval. Voici le moyen d'obtenir le sérum gélatinisé. On saigne un animal en introduisant dans la veine jugulaire un trocart stérilisé qui communique avec l'effilure latérale d'un ballon dont le col est bouché à la ouate, et qui est également stérilisé (voyez fig. 9) . ”

“ Les plaques d'agar ont l'avantage de pouvoir être maintenues à une haute température (étuve à incubation) , qui rend plus rapides le développement des germes et la formation de colonies visibles, et permet par suite d'obtenir le résultat de l'analyse en un temps plus court. En outre, elles doivent être recommandées notamment dans les cas où la présence de nombreuses espèces de bactéries liquéfiant la gélatine (voy. p. 225) est une cause de perturbations, lorsqu'on se sert de la méthode précédemment décrite. ”

“ Ils croissent sur la gélatine, l'agar-agar, le sérum. Ils ne sont pas aussi anaérobies que ceux de l'oedème malin, mais cependant on peut les cultiver aussi sur des plaques, dans le vide ou dans une atmosphère d'hydrogène. Les colonies, sur plaques d'agar-agar, sont ramifiées à la périphérie. Dans la gélatine, qu'ils liquéfient, ils donnent lieu à des globes liquides et troubles. Ils dégagent beaucoup de gaz, surtout si l'appareil est tout à fait privé d'oxygène. Ce gaz a une odeur extrêmement fétide. Ils décomposent aussi le sérum du sang et l'agar-agar. ”

“ L'agar, aussi appelé agar-agar, ou gélose, est une substance gélatineuse provenant de différentes espèces d'algues marines; mélangé avec d'autres matières nutritives, il con-
stitue un milieu nutritif très convenable dans un grand nombre de cas. Le point de fusion de l'agar est un peu plus élevé que celui de la gélatinp; il est voisin du point d'ébullition de l'eau, tandis que sa coagulation commence à 40° environ. Cette différence fait de ce milieu nutritif une préparation indispensable en maintes circonstances. ”

“ A differenti intervalli si facevano poi innesti in agar e si lasciavano le culture ad adatta temperatura e per un tempo sufficiente, a fine di vedere, dallo pviluppo in questi tubi di agar, fino a quando i microorganismi erano rimasti viventi.
I
Une prima serie di ricerche (1) furono fatte con i bacilli della peste e del colera, s'oipesi in diversi liquidi : soluzione fisiologica, brodo, orina, siero di sanguc, latte. ”