André Charles Hollande

“ Recherche de l’ovalbumine directement sur.
l’urine. — Opérer autant que possible sur Purine fraîche. Dans deux petits tubes de verre, on verse : dans l’un, un demi-centimètre. cube de Purine sus-pecte, dans Pautre, un égal volume de sa propre urine, ou, de préférence, du liquide physiologique (NaCl à 9 p. 1000) . Puis dans chacun de ces tubes, on laisse tomber environ cinq gouttes de sérum anti-ovalbumine, soit le contenu d’une ampoule. (Casser Pampoule aux deux extrémités, puis accoler un des orifices formés contre la paroi du tube ; par capil-larité le liquide s’écoulera de lui-même) . ”

“ Lorsque les lapins en traitement auront acquis un sérum suffisamment riche en précipitines, soit par exemple après la dixième injection d’ovalbumine, on prélèvera uniquement — et aseptiquement — le sang des lapins reconnus bons ”

“ Pour un bon sérum, on devra obtenir un abondant précipité dans les tubes A, B et C, en moins d’une minute ; dans le tube D, le précipité sera plus lent à se former, mais devra etre très net en moins de trois minutes. Un sérum qui ne donnerait qu’un léger précipité dans le tube C et rien, ou à peu près rien, dans le tube D devra être considéré comme médiocre. Un sérum qui ne donne-rait qu’un léger précipité dans le tube B et seulement um faible loucbe, lent à se former, dans le tube C devra être rejeté comme impropre à la recherche de l’ovalbumine dans l’urine. ”

“ Toutes les fois que l’on se trouvera en présence d’une urine ayant un aspect trouble et montrânt à 1 ’examen microscopique de faux cylindroïdes le plus souvent chargés de bactéries, on pourra supposer une albuminurie simulée.
Les réactions chimiques (précipité caillèboteux par la chaleur, reactif de Maurel) , les méthodes chimiques de Peltrisot surtout (acide acétique) et de P. Godfrin (chlorure de sodium acétique) fourniront des indica-tions précieuses et de fortes présomptions quant à la nature (ovalbumine) de la substance albuminoïde introduite dans Purine suspecte. ”

“ Agitée au contact de l’air avec un agitateur de verre, le trouble augmente de même que le nombre dés fîlaments. II se forme assez facilement une écume à la surface de l’urine et cette écume persiste longtemps.
Lorsque la quantité de blanc d’oeuf a été introduite en abondance dans l’urine, on constate que celle-ci, au repos, se divise en deux zones : l’une dense, située à la partie inférieure du récipient est formée princi-palement d’une substance sirupeuse contenant des masses globoïdes, transparentes et de dimensions variables ”

“ Si l’emploi d’un sérum anti-ovalbumine de poule permettait de clifférencier les albummes du blanc d’oeuf des albumines pathologiques de l’urine de l’homme, il importait d^’étudier sur un grand nombre d’échantillons d’urine humaine l’action de ce sérum et de savoir comment il se comporterait vis-a-vis d uri-nes plus ou moins riçhes en sels, la réaction des preci-pitines étant une réaction physico-chimique. ”

“ De même qu’en méde-eine légale, seule la réaction des précipitines a de la valeur pour afflrmer la présence de sang d’homme, -on ne pourra afflrmer de façon absolue la présence, dans une urine, de l’ovalbumine, si l’on n’a pas obtenu le précipitê spécifique d’un, sérum antiovalbumine à son contact. ”

“ Toutes les fois que Pon aura obtenu un précipité avec Purine suspecte, on devra, en outre, contrôler Paction précipitante du sérum avec une urine ou du liquide physiologique renfermant environ 1 cenlâ-mètre cube de blanc d ’oeuf pour 100 centimètres cubes d’urihe.
De rares urines donnent parfois un léger louche au contact du sérum. Ces urines ont une densité très faibles ou sont déchlorurées. Pour éviter la formation de ce louche, il suffit d’additionner de telles urines d’une quantite de NaCl suffisante pour ramenef le titre des chlorures au taux normal ”

“ Lorsque Purine renferme de Povalbumine, on voit se^ produire assez rapidement, à la limite de sépara-tion du liquide et de Purine (partie inférieure du tube) , un précpité qui va en augmentant de plus en plus, pour devenir très net au bout de quelques minutes ; en agitant, le trouble augmente. Le tube témoin ne doit jamais présenter de précipité, lorsque le sérum est bien conservé. ”

“ Recherche de l’ovalbumine dans les matières albuminoïdes extraites de l’urine. — Saturer 25 centi-mètres cubes d’urine par du sulfate d’ammoniaque, laisser en contact 10 minutes ; filtrer ; verser sur le filtre, bien égoutté, 5 centimètres cubes d’eau distillée pour dissoudre le précipité, puis laver de nouveau le filtre avec 20 centimètres cubes d’eau physiologique renfermant 9 grammes de NaCl pour 1000 centimè-tres cubes d’eau distillée ; faire repasser sur le filtre, à plusieurs reprisés, le filtrat, jusqu’à ce que tout le précipité soit dissout. ”

“ Une lapine gravide est en général pen prodnctrice de précipitines.
Malgré tontes les précantions minntienses qne l’on peut prendre, il arrive assez fréqnemment, ponr des
raisons que nons n’avong pu déterminer, que des lapins ne réagissent pas ou très peu vis-a-vis de l’ovalbumine, il est done utile de traiter trois ou quatre lapins au moins à la fois (1) . Sur dix lapins, on rencontre en général un ou deux lapins qui ne pro-duiront pas de sérum précipitant. Çertaines races de lapins paraissent même plus favorables que d’autres. ”

“ Toutes les fois qn’il sera possible, il sera donc préférable d’employer le réactif de Manrel.
La présence d’ovalbnmine se tradnit par la forma-tion, en quelques minntes, d’nn précipité à la limite de séparation des liquides. Ces deux réactions ne doivent être considérées qne comme indicatrices et non comme spécifiqnes. Elles ne se prodnisent pas en général avec l’albnmine et la globuline dn sérum de l’homme, mais penvent avoir lieil ayec certaines albumines (albnmoses) de l’nrine humaine, on lorsque l’urine renférme dn sang et dn pns. ”

“ Les masses globoïdes, plus denses que l’urine, sont nettement visibles quand on les examine au jour fri-sant ; lentement déplacées au moyen d’un agitateur de verre, qfles laissent apercevoir de fines stries inco-lores de dissolution,, semblables à celles que l’on obtiendrait en dissolvant lentement de la glycérine versée au fond d’une urine. Jetées dans l’eau bouil-lante, ces masses se coagulent spontanément par la cbaleur ; triturées entre les ' doigts, elles ont alors l’odeur « sui generis » très nette du blanc d’oeuf coagulé. ”

“ Comme on peut s’en rendre compte à la lecture de l’exposé qui précède,mous aVons tenu à rapporter fidè-lement, d’une façon impartiale, les diverses opinions des auteurs ; d’une manière générale, l’action spéci-fique du sérum antiovalbumine est admise par tous pour identifier l’ovalbumine de poule dans l’urine. Le seul reprocbe que l’on puisse faire à la technique de cette méthode biologique, si précieuse, e^t l’appari-V
l’appari-V
. ”

“ II nous a été ainsi possible, durajit les bostilités, de déceler une albuminurie simulée par un homme aveç le seul examen micros-côpique^ du culot de centrifugâtion de son urine émise en notre ppé-sence, Cet homme, qui avait étê^ envoyé dans un centfe spécial pour albuminurie et qui n’avait pas, d’albumine dans ses urines, avait trouvé très simple de prélever dàns une flole l’urine .albumineuse de son voisin et d’en verser une partie, au laboratoire, dans le verre, dams lequel il urinait. ”

“ Un interné civil allemand, atteint d’albuminurie chro-nique, doit être évacué en Suisse ; à la veille de son dé-part, son urine est examinée à L. \. ; la quantité oonsi-dérable d’albumine que l’on y renoontre ' fait soupçonner une simulàtion ; en présence de médecins suisses, on effectue lesi réactions de Maurel et de l’acéto-formol ; elles
(1) Cf. Albuminurie provoquée par lavement d’éprfeuve de blancs d’oeuf et réaction des précipitines spécifiques, par A.-Ch. ”

“ La présence de l’ovalbnmine (dans l ’urine) , se traduit par la formation à la zone de séparation (dn réactif et de l’ùrine) d’nn anneau, plns on moins opaque et plns ou moins volumineux, mais tonjonrs très net et bien délimité. Cet annean seul est caracté-ristique et se produit très rapidement avec des doses d’ovalbumine snpérienres à 0 gr. 20 par litre, mais exige trois minntes qnand la dose d’ovalbumine est - inférieure à 0 gr. 10 par litre. En aucun cas, il ne fant tenir compte du léger louche plus on moins ditfnsé dont l’origine vient d’être expliqnée. ”

“ L’urine est émise en notre présence. Nous ne notons rien d’anormal. L’analyse de l’urine révèle rexistence d’albu-mine à la dose de 0 gr. 20 par Htre ; .Fémission comprenait environ 80 C'entimètres cubes ; la densité de l’urine est de 1025.
L’urine était louche. A l’exam'en microscopique du dépôt, nous notons la présenoe de leucocytes et de rares g'ono-dôques ; l’absence dte cellules épdthéliales vésicales mon-trait qu’il n’y avait aucune réaction catarrhale de la vessie.
Le réactif indicateur de Maurel et racéto-formol don-nent un précipité au oontact de l’urine. ”

“ Pour obtenir un bon sérûm antiovalbumine, il est donc utile et nécessaire d’injecter aux lapins, au
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(1) L’apparition des précipitines par injectiôns soue-cutanées de petites doses d’ovalbumine —on Obtient les mêmes résultats après d* semblaLles injections intrapéritonéaies — est bien plus lente à se produire (30 jours environ) ^ que lorsqu’il s’agit d’hémolysines '8 jours d’après SÉZARY) ; elle varie du reste d’un animad à l’autre. ”

“ Les .injections an lapin doivent être pratiquées avec tonte l’asepsie possible ; la pean du dos de l’animal dévra être rasée à la tondeuse, pnis lavée à la tein-tnre d’iode ; on ne devra ntiliser ponr l’injection qn’nne seringne et nne aiguille bonillies dnrant nn qnart d’heure.
La formation d’abcès caséenx sons-cntanés chez les lapins est très fréqnente et se prodnit aisément. II y a grand intérêt à éviter de tels abcès ; sitôt l’abcès formé, on devra pratiqner le plns rapidement possible son incision, vider son contenu par pression et le traiter à la teintnre d’iode. ”

“ Ed.-Justin MUELLER (1918) n’utilise que le réactif de Maurel, modifié par lui, pour la reclierche de Poval-bumine dans les urines, et conclut à la présence de cette substance, lorsque Purine renferme des fila-ments, donne un précipité cailleboteux en milieu acé-tique par la cbaleur, et un préeipité au contact du réactif de Maurel. ”

“ Le serum antiovalbumine de poule, par sa réaction spécifîque des précipitines, identifiera, de façon pré-cise, soit dans Purine même, soit dans le liquide phy-siologique contenant les substances albuminoïdes
extraites de rurine par le snlfate d’ammoniaque, l’albumine de l’nrine sonmise à Panalyse. ”

“ Le mode de préparation dn sérnm antiovalbnmine, son titre constant en précipitines, sa conservation rela-tivement longue (six mois à un an) permettent actuel-lement de considérer notre sérum antiovalbnmine comme un réactif très sensible, qne l’on pent avoir constamment Sons la main et qni, seul, est spécifique de l’ovalbumine. ”

“ Lorsque l’nrine renferme de l’ovalbumine, on obtient par la cbaleur, après addition de qnelqnes gouttes d’acide acétiqne an dixième, nn précipité ayant nn aspect assez particnlier ; il est cailleboteux, formé de grnmeanx plns on moins filamentenx, coton-nenx, denses et tombant assez rapidement an fond du tube à essai. ”

“ Réactif de Maurel, réaction négative.
Réactif acéto-formol, réaction négative.
iSérum antiovalbumine, réaction négative.
Examen microscopique : présence de cellules épithé'- liales nombreuses ; absence de pus et de sang.
Gomme on le remarquera, la première èmission d’urine de S.. ; renfermait de rovalbumine, la seconde émission effectuée une heure après la précédente n’en contenait piüs et ne renf'ermait pas d’albumine p'athologique.
S... étant atteint de néphrite caractérisée par la pré-sence de cylindres hyalins dans la première émission de ses urines, et âyant dit avoir pris le. ”

“ De la valeur des réactions chimiques pour la différen-ciation de Povalbumine de la séro-albumine dans l’urine de Phomme.
Les réactifs cliiiniqnes (acéto-formol et Maurel) qne nous avions indiqnés en 1915 connne ponvant être utilisés ponr mettre en évidence l’ovalbnmine de ponle dans l’nrine de l’homme, ont fait, depnis, le snjet de nombreuses recbercbes de la part-des antenrs. ”

“ « Contrairement à ce què j’ai précédemment'-écrit, dit P. GODFEIN (1918) , ce réactif est assez sensible ; mais, son action, de même que celle de l’acide acé-tique (1) , ne s’exerce pas snr l’ovalbumine en solntion aqueuse et elle s’exerce mal en présence d’nne trop faible proportiqn de sels. C’est ponrqnoi les essais qne j’avais çffectnés snr des urines dilnées avec de l’eau ne m’avaient pas fourni de résultats satisfai-sants. En somme, comme le réactif de'Manrel, c’est nniqnement à l’acide acétiqne qne celni-ci doit ses propriétés. » ”

“ Enfin, on tyndalise à 50° durant 4 beu-res, trois fois de suite à 24 heures d’intervalle. II est important de ne pas dépasser la température de 50° centigrades.
Le sérum réparti ainsi en Après la dernière tyndalisation, on dèvra procéder à un nouveau titrage comme il a été indiqué plüs haüt. Ce contrôle est utile. ”

“ Dans nn senJ cas, le sérum anti-ovalbnmine ponrra se montrer en défaut ; ce cas ne s’est jamais révélé dans la pratique, et npns nons sommes bien gardés de l’indiqner dnrant les bostilités. Nons avons reconnn en effet qne, si le simnlatenr, an lien d’introdnire dans son nrine de l’ovalbumine, y versait de l’ovalbn-minate de soude, le sérnm antiovalbnmine serait sans action snr l’ovalbnmine transformée ; — encore fan-drait-il expressément qne toute l’ovalbnmine (1) soit transformée en sel alcalin, ponr ne pas obtenir de précipité. ”

“ Dans ce cas, il suffit, comme nons l’avons déjà dit précédemment, de cblornrer de teïles urines ponr éviter généralement le louche en qnestion. II n’y a d’aillenrs rien de conparable entre ce louche (dû à la précipitation légère des globnlines dn sérnm an contact d’nn liqnide peu riqhe en snbs-tances salines) et la formation dn précipité qne l’on obtient en présence des faibles qnantités (0 gr. 10 par litre par exemple) d’ovalbumine qne l’on pent ren-contrer dans l’urine. ”