Paul Pacottet

“ Les premiers ensemencements faits dans des tubes de touraillon gélatiné donnent des colonies aussi bien à la surface qu'en profondeur de la matière. La levure conserve encore sa vie anaérobie. Mais, en prenant ces colonies premières et en les ensemençant par séries successives sur milieu solide et non sucré, la vie en profondeur (anaérobie) diminue et le développement se limite bientôt à la surface en prenant un aspect de plus en plus aranéeux. ”

“ C'est aux sclérotes que le rôle de conservation et de perpétuation du parasite nous paraît surtout dévolu. Les autres formes du Champignon peuvent cependant, ainsi que nous le verrons, jouer , un certain rôle.
Les sclérotes ont été signalés par Gœthe (1) , puis par MM. Gouirand et - Bergeron (2) . On pouvait cependant émettre des doutes sur la nature des corps qu'ils décrivent ; nous avons, pour notre part, fait des bouturages directs des tissus de ces sclérotes ; ces ensemencements nous ont permis d'obtenir, sur les divers milieux, les formes variées de l'Anthracnose. ”

“ Dans nos nouvelles cultures, que nous avons pu varier pendant plus de deux ans, nous avons obtenu, après avoir fixé la forme levure bourgeonnante, toutes les variations de types décrites pour les levures ordinaires, même pour les plus actives au point de vue de la fermentation. Ces formes sont pour le Manginia ampelina : 1° la forme simple, apiculée ou plus ou moins ellipsoïde ; 2° la forme ascosporée ; 3° la forme à cellules géantes ; 4° les cellules durables qui forment transition aux kystes. ”

“ D'autre part, le passage rapide, — bien plus rapide qu'avec les autres organes du Champignon, — des kystes à la levure, est un fait à retenir et qui nous parait concorder dans le même sens. Enfin nous pourrions rappeler que les levures même les plus actives n'arrivent à leur maximum de pouvoir ferment qu'après une accoutumance progressive et plus ou moins rapide à l'alcool. Il est vrai que nos expériences sur la possibilité d'augmenter par l'accoutumance ce pouvoir ferment de l'Anthracnose ne sont pas suffisamment avancées. ”

“ Les lésions observées par MM. A. Charrin et A. Le Play sont encore intéressantes au point de vue de l'évolution morphologique du Manginia ampelina; ces expérimentateurs n'ont jamais inoculé que des spermaties des spermogonies et, dans les lésions produites, de préférence dans les canaux biliaires, le parasite (Fig. 23 et 24, c d) a évolué sous forme de levures et surtout de cellules durables identiques à celles de nos cultures.
Le passage du Champignon à cette forme levure et à son dérivé, la cellule durable, a été, dans ces conditions, assez rapide et direct. ”

“ La forme levure bourgeonnante se fixe de plus en plus. Si on la prend aux premières périodes et qu'on la porte sur des milieux non sucrés, solides, on revient presque aussitôt à la forme mycélienne à tubes fins normaux du Manginid. Mais si on laisse l'évolution se poursuivre ou que l'on réensemence successivement sur des milieux sucrés, la forme levure et bourgeonnante est fixée. ”

“ La cellule de levure pour se développer en cellule durable paraît s'allonger et se distendre un peu. Son protoplasme devient plus grumeux ; puis elle passe successivement par des teintes grisâtres et de plus en plus foncées en brun. Pendant cette évolution de la membrane externe, il se forme une membrane interne incolore très nettement visible à l'intérieur de l'enveloppe. ”

“ Ces dernières, très rares, sont le résultat d'un enkystement se produisant sur la levure peu après son bourgeonnement. -
Nous obtenons toujours les cellules durables quand nous mettons les levures dans les mêmes conditions de milieux de culture ; c'est un fait constant. ”

“ Lorsque nous avons eu fixé en milieu sucré les levures bourgeonnantes, nous avons essayé leur action directe sur des grappes à divers états de développement en les maintenant en serre, en pleine lumière, depuis la floraison jusqu'à la maturité, et cela de mars jusqu'à fin juin. ”

“ Il en est de même pour une forme de kystes simples, vraies chlamydospores qui, avant de se dissocier, se présentent dans certaines cultures entremêlées à de rares spermogonies sous forme de gros filaments à cloisons très rapprochées (Fig. 39) qui s'entourent
comme les chlamydospores d'une double membrane et brunissent de plus en plus (Fig. 39, b, b) . C'est toujours à la surface des masses mycéliennes que cette production a lieu et on trouve tous les états depuis le filament à cellules courtes et à peine fuligineux (a, a) jusqu'au chapelet de chlamydospores à membrane noire (b, b) . ”

“ Les éléments des kystes monosporés, mis directement dans des milieux sucrés, peuvent germer en produisant un mycélium composé d'éléments en chapelets qui bientôt se séparent en levures bourgeonnantes, comme cela a lieu pour les cellules durables. ”

“ La nature des kystes nous paraît, pour l'instant du moins, très difficile à interpréter. Ce sont incontestablement des organes de résistance maximum pour la conservation de l'espèce.
Leur membrane commune et leur membrane propre, très épaisses, doivent les protéger facilement contre les agents extérieurs. Mais ces kystes sont-ils une simple production de spores endogènes ou bien correspondentils, pour la forme mycélienne, à ce que sont les cellules durables pour les
Fig. 40. — Fragment d'un sclérote de chancre d'Anthracnose sur sarment aoûté vu par sa surface ”

“ Les petits noyaux sont toujours facilement décelables par les colorants (violet de gentiane surtout) , même dans les tubes les plus fins ; le noyau est toujours unique dans chaque cellule composante. Quand le
Fig. 56. — Conidiophores du M. ampelina sur un chancre de rameau herbacé; a : conidies; b : stroma mycélien d'où partent les conidiophores serrés (Grossissement : i30/ i) -
filament est très loncé, il est très difficile de révéler le noyau.
Fig. 57. — Conidies des chancres du M. ampelina (Grossissement : Hmh) .
Fructifications conidifères. ”

“ Si nous ensemençons par une spermatie (ou une levure, ou du mycélium, etc.) un ballon de bouillon de carotte acidifié par de l'acide tartrique ou un ballon de bouillon de riz, le mycélium se développe sous forme d'un voile fin neigeux (Fig. 4, a a) . Puis le voile s'épaissit, quelques rares spermogonies se forment sur la couronne du voile contre le verre. Le voile s'accroît en épaisseur et - flotte de plus en plus, en poussant dans le liquide. Les spermogonies ne se ”

“ Les cellules durables s'observent surtout sur milieu solide à la surface des mucus de levures dont les articles sont séparés et qui sont en transition mycélienne, lorsque le milieu reste sucré ou est physiquement défavorable au bourgeonnement.
Nous préciserons ces faits après avoir décrit ces diverses formes.
Forme bourgeonnante. — Le mycélium normal de l'Anthracnose, audébut des cultures aussi bien que dans les organes envahis, est régulier, fin, incolore (Fig. 1 a, a) ; il renferme un protoplasme finement granuleux
Fig. 1. — Mycélium du Mangiriia ampplina, au débutdes cultures ”

“ Fig. 10. — Levure ronde de Duclaux en sporulation (Grossissement : 900/) ) .
(Mg. b, 7, 8) , produisent, par formation endogène, quand on les transporte sur plâtre, sur porcelaine, ou même parfois dans les-vieilles cultures en milieu épuisé, et, en somme, dans de mauvaises conditions de végétation, des spores internes dans les cellules mères considérées ainsi comme des asques. C'est par ce procédé que nous avons fait fructifier une levure ronde (Fig. 10) , une levure apieulée (Fig. 6) ; ces levures donnent de deux à
quatre spores endogènes, ou plus, à membrane propre. ”

“ I!s se séparent, au bout d'un temps assez long, du mycélium devenu mucilagineux. Leur évolution ultérieure est confirmative de leur nature endogène. Les dimensions des kystes sont de 8 à 12 pour les simples et de 15 à 40 p. pour les polysporés.
Quand les kystes mûrs, nouvellement formés ou très anciens, évoluent, on voit, — dans le type le plus simple, celui des kystes monosporés (Fig. 36, A, B, E, G, H) -, le contenu sortir par déchirure comme dans le cas des cellules durables en présentant une ou deux vacuoles et ayant une membrane propre incolore ou légèrement fuligineuse.. ”

“ Les spores de ces conceptacles (auxquelles nous avons maintenu
le nom de spermaties poui les distinguer de celles des conidies vraies) , quand elles sortent en masses agglomérées de l'ostiole, au lieu d'être hyalines, donnent à la masse une teinte rosée claire. Dans les liquides de cultures où la production des spermogonies est très abondante, les spores sortent en quantité tellement abondante qu'elles se ramassent dans le fond des récipients sous forme de dépôts épais, rosés. ”

“ Bien souvent, lorsque, par suite de conditions particulières mal déterminées (plus grande résistance de la plante, plus mauvaises conditions de végétation pour le Champignon) , la lésion se creuse lentement ou le
chancre s'arrête dans son développement, les tissus (Fig. 54) prolifèrent autour de la lésion primitive (a) en formant du bois secondaire qui recouvre (C) parfois, par poussées successives., le tissu altéré. Les sclérotes dans ce cas (D, D) se produisent de très bonne heure, dès le début de l'été.
Chancres d'automne. ”

“ Beaucoup de ces cellules géantes, après avoir produit une ou deux cellules filles, aussi grosses qu'elles, meurent ou n'évoluent plus. Leur nature est plutôt anormale, tératologique ; leur rôle ne nous apparaît pas d'une façon bien nette si ce n'est dans la transition de la forme mycélienne à la forme levure, quoique cependant cette transformation du mycélium en levure ou le retour de la levure au mycélium soit plus fréquent sans intermédiaire par la cellule géante.
Cellules durables. — Une autre forme d'organes est consfante pour la levure du Manginia cnnpelina ”

“ Sur les jeunes chancres des organes herbacés, le centre des lésions est formé par un stroma conidifère identique à celui des vieux chancres que les sclérotes poussent au printemps et que nous avons représenté dans les Figures 50, 53.
Sur les chancres des sarments, les conidies sont produites par des basides
serrées (Fig. 56) donnant une ou plusieurs conidies en bâtonnets (Fig. 57) . Les conidiophores des sclérotes des chancres (Fig. 53) paraissent plus longs, plus vigoureux et, au lieu de produire une ou deux spores seulement à leur sommet, ils en donnent parfois plusieurs (3 et 4) . ”

“ Les tubes à peine teintés, à assez fort. diamètre, montrent, à l'aide des colorants, des noyaux relativement gros, un peu allongés. Les arti des qui se forment par division nucléaire deviennent plus courts que sur le mycélium d'origine. Le protoplasme, sans vacuoles, y est finement grumeux.
Certains articles du mycélium, quand il est très ramifié, plus
Fig. 29. — Kystes unicellulaires A A mûrs sur le mycélium m du M ampelina (Grossissement : 900/i) .
courts sur le parcours du marnent, se renflent ; leur protoplasme est plus finement grumeux, plus dense. ”

“ C'est peu probable, car on a décrit j des formes à périthèces (?) pour certains GlœosporÙun. Si cette observation 1 est exacte, il se peut qu'à un moment donné nos cultures nous donnent des périthèces, ce que nous n'avons d'ailleurs jamais obtenu en milieu artificiel pas plus pour l'Anthracnose que pour le Black Rot et le Rot Blanc, parasites qui appartiennent au mçme groupe de Champignons. La vraie nature morphologique de ces kystes nous parait donc devoir être encore réservée.
La transition des kystes complexes aux cellules durables par les kystes simples ou doubles est nette. ”

“ Germination des spores endogènes des kystes ; b : spore endogène ; a, a : spores endogènes en germination mycélienne, le contenu non représenté (Grossissement : 1000/t) .
ble avoir épuisé ce milieu par une vigoureuse et abondante végétation.
Sur les grosses lames mycéliennes des ballons par exemple, le mycélium feutré, très abondant, ayant produit quantité de fructifications
conidifères ou pycnidiennes, brunit de plus en plus, s'affaisse, ne fructifie plus normalement ”

“ Ce retour, normalement si lent, de la levure au Champignon est activé beaucoup par la lumière et par le froid. L'expérience démonstrative a été faite en mettant d'une part des cultures (déjà en retour vers le mycélium) dans l'étuve à 28°, pendant les mois de juin et juillet. Ces cultures, déjà assez avancées vers la forme mycélienne, ont continué à donner, dans 1 étuve à l'obscurité, en bouillon liquide de haricot non sucré, quelques .trames mycéliennes à cellules durables en surface et toujours des cellules bourgeonnantes en dépôt, et cela pendant une période de quinzé jours. ”

“ Dans des fragments de foie, prélevés aussitôt après la mort, fixés au liquide de Lindsay et à l'alcool, on observe une véritable infiltration du Champignon. A côté de régions absolument indemnes, en général au voisinage des espaces de Kiernan on décèle des zones où le parenchyme présente un état de désorganisation avancée. ”