Frédéric Aronssohn

“ Le pouvoir glycolytique défini par M. Lépine « la perte pour 100 de sucre que le sang subit s'il est maintenu une heure au bain-marie à 38-39° » étant de 25 pour l'homme à l'état physiologique, il tombe à 2 dans un cas de diabète sucré et pour une pneumonie s'élève au contraire à 35.
Quant aux réactions qu'effectue le ferment glycolytique en détruisant ou transformant le sucre, elles sont inconnues La nature des produits élaborés n'est donc pas déterminée au moins totalement; car d'après MM. Kraus et Seegen, il y a production d'acide carbonique pendant la glycolyse. ”

“ De toute façon les expériences que j'ai faites avec des doses extrêmement petites d'acide lactique et de carbonate de soude, font voir l'importance des variations de l'alcalinité du sang quant à son pouvoir glycolytique, M. le professeur Lépine a montré tout l'intérêt qu'il faut attacher à la mesure de ce pouvoir au point de vue clinique. La glycolyse est d'une intensité fort différente suivant les états pathologiques. ”

“ Je ferai observer toutefois que le précipité produit dans la macération globulaire par le sulfate d'ammoniaque, ne présente, quoique de nature albuminoïde, que fort peu l'apparence floconneuse mais plutôt l'aspect grenu. Or d'une façon générale ce sont les précipités volumineux et de nature colloïde que l'on cherche à produire dans les liqueurs, pour fixer les ferments.
Il ne serait donc pas surprenant que ce précipité par le sulfate d'ammoniaque ne soit pas propre à
retenir le ferment, l'on a affaire dans ces conditions à un cas tout particulier. ”

“ Ensuite le ferment disparaît graduellement.
La température agit puissamment sur ce ferment, dont l'action nulle à 0° va croissant jusqu'à une température de 54° environ ; au delà de laquelle la glycolyse cesse brusquement. A 54°5 il y a destruction irrémédiable du ferment.
Ce dernier n'est pas insensible aux quantités de glucose, en présence desquelles il se trouve ; il possède une suractivité d'autant plus marquée qu'il y a plus de sucre dans le sang.
Ce fait cadre mal avec la notion de l'indépendance de l'énergie d'un ferment par rapport aux quantités
de matières à transformer. ”

“ J'ai toujours eu des produits d'une activité infiniment moindre que le sang.
Action de l'acide lactique sur le ferment glycolytique
Les acides en général paraissent nuisibles au ferment glycolytique. Claude Bernard recommandait, au cas où l'on voulait surseoir à un dosage de sucre dans le sang, d'additionner la prise d'acide acétique.
MM. Lépine et Barrai ont montré que l'acide carbonique paralysait fortement la glycolyse, mais non d'une façon permanente puisqu'il suffit de l'enlever à la pompe à mercure, pour rendre son activité au ferment. ”

“ Toutes les expériences sur le ferment glycolytique se ramenant à des dosages de glucose dans le sang, les auteurs qui ont étudié cette question ont décrit avec détails les différents procédés employés au cours de leurs travaux.
Je ne les exposerai pas ici et me contenterai de donner la technique que j'ai suivie, ainsi que les raisons m'ayant amené à modifier l'une des nombreuses méthodes déjà existantes. Je dois ajouter que cette technique est analogue à part certains détails à celles décrites entre autres par MM. Dastre et Arthus (1) . ”

“ J'ai voulu voir comment le ferment glycolytique se -comporterait avec des doses croissantes d'acide. Je me suis adressé de préférence à l'acide lactique puisque c'est lui que l'on soupçonne (Cl. Bernard, Seegen) être un des produits de la destruction du sucre.
De plus il n'est pas volatil à la température des expériences, enfin étant un acide organique il doit avoir un effet plus ménagé sur les matières protéiques que les acides minéraux.
Comme véhicule du ferment je m'adressais au sang
défibriné, directement. ”

“ Mettant le tout dans la presse à sang on exprime vigoureusement.
En réalité je crois la diffusion au moins aussi efficace que la presse pour de petits coagulums. le glucose se trouve aussi bien extrait du précipité par Tébullition avec l'eau seule, que par adjonction de l'expression. Les manipulations avec la presse entraînent toujours des pertes de liquide, tandis que la filtration suivie de l'enlèvement du coagulum resté sur le filtre et sa remise en suspension peuvent être effectuées sans aucune perte. ”

“ Le ferment glycolytique n'est pas sensiblement entraîné par la formation du précipité d'albuminoïdes qui prend naissance lorsque l'on sature une macération fraîche de globules sanguins par le sulfate d'ammoniaque. On peut constater la présence du ferment glycolytique dans le liquide surnageant le précipité.
2° L'acide lactique et le carbonate de soude diminuent la glycolyse même à des doses très minimes et du même ordre de grandeur. ”

“ J'ai obtenu ce dernier dans un milieu particulier mais pas plus que mes devanciers je n'ai pu arriver à produire un liquide dont l'activité serait plus grande que celle du sang, source du ferment ; au contraire toute manipulation que l'on fait subir au sang paraît amoindrir son pouvoir glycolytique et cela d'autant plus que l'on prolonge les manipulations plus longtemps. ”

“ De plus contrairement aux propriétés que l'on assigne aux ferments, nous voyons ici un précipité d'albuminoïdes, produit au milieu d'un liquide contenant un ferment, ne pas fixer ce dernier ; bien plus, le ferment reste libre dans la liqueur baignant le précipité. ”

“ Une dissolution de 1 gramme 220 de sulfate d'ammoniaque dans 200 centimètres cubes d'eau est alcalinisée fortement par du carbonate de soude, on y ajoute 6 à 8 grammes d'acétate de mercure broyé avec un peu d'eau. On a soin de maintenir l'alcalinité de la liqueur au moyen de carbonate de soude ajouté goutte à goutte, finalement on obtient un précipité teinté en jaune. Au début et probablement tant que l'ammoniaque ne fut pas totalement précipitée ce dernier était blanc pur. On centrifuge pour séparer le précipité, on le lave à plusieurs reprises avec de l'acétate de mercure à 1 pour 100. ”

“ Ce dosage avait été exactement fait comme les précédents et prouvait l'existence du ferment dans le liquide placé sur le dialyseur.
L'explication de cet échec peut être donnée de bien des façons, néanmoins je crois que le ferment s'est détruit dans la dialyse d'une façon spontanée. Il est très altérable, du sang abandonné à lui-même, dans les meilleures conditions, voit son pouvoir glycolytique décroître fort vite ; ainsi que MM. Lépine, Arthus l'ont démontré, le sang possède un pouvoir glycolytique maximum dans les premières heures suivant la saignée, ensuite ce pouvoir faiblit rapidement. ”

“ On jette sur un petit filtre sans plis, le liquide passe avec la facilité de l'eau pure ; le coagulum restant est enlevé délicatement avec un agitateur aplati en stapule courbe. On écrase ces fragments de sang cuit dans la capsule qui a servi en premier lieu, et l'on
fait bouillir à nouveau quelques minutes avec 50 centimètres cubes d'eau et sans autre addition d'acide acétique. ”

“ On filtre sur coton "de erre et l'on centrifuge 225 centimètres cubes de sang défibriné. Au bout de deux heures on décante 85 centimètres cubes de sérum, on les remplace par autant d'une solution de chlorure de sodium à 7 grammes par litre et après mélange on abandonne vingt heures à une température voisine et même plus basse que celle de 0° après addition de thymol.
La macération est saturée de sulfate d'ammoniaque en petits cristaux, jusqu'à avoir un excès de sel dans la liqueur. On filtre le tout à la trompe sur la plaque de porcelaine percée et armée de papier. ”

“ Le liquide à défequer étant porté à l'ébullition, je pulvérise deux grammes d'acétate neutre de mercure avec un peu d'acétate de potasse et après les avoir délayés dans quelques centimètres cubes d'eau, je verse le tout dans la liqueur à l'ébullition. On laisse au contact une douzaine d'heures en agitant de temps à autre. ”

“ Le sang contient en effet des sels polybasiques dans un équilibre tel, que l'introduction d'un réactif suffit à changer l'état des constituants du liquide. Mais d'autre part le ferment glycolytique se prêtant mal à son obtention dans des conditions meilleures, j'en revins à l'emploi du sang après avoir essayé de macération de fibrine, de globules, etc., toutes opérations aboutissant à la pré~ aboutissant à la préparation d'un liquide doué d'un pouvoir glycolytique infiniment moindre que le sang défibriné ainsi que je l'ai dit précédemment. ”

“ Le sang renferme à l'état physiologique du sucre, fait - établi par Claude Bernard ; mais les travaux de ces dernières années ont montré que si le glucose existe bien dans le sang en nature, il n'en est pas
(1) Dastre, Dosage du sucre dans le sang. Arch. Physiol., 1891.
M. Arthus, Glycolyse dans le sang et ferment glycolytique.
Arch. Physiol., 1891.
moins vrai qu'il n'y est pas seul (M. Hanriot, Hédon) (1) , il est accompagné en quantités variables par d'autres corps réducteurs dont en particulier l'acide glycuronique et parfois d'autres sucres (Lépine et Boulud) . ”

“ MM. Lépine et Barrai ont d'ailleurs démontré que le ferment glycolytique est fixé par le phosphate de chaux. Pour ce réactif au moins dont le pouvoir précipitant est général, le ferment glycolytique ne s'écarte pas de la règle commune. ”

“ Il est bon de faire plusieurs dosages successifs, tout dépendant de l'aptitude de l'opérateur à saisir les variations de couleur. Pour cette même raison il faut titrer de suite la liqueur cupro-potassique. Différentes méthodes peuvent être employées, mais celle que j'ai adoptée évite les erreurs causées par les variations de la dilution du glucose et de la liqueur de Violette. ”

“ Dans le cas particulier les erreurs sont théoriquement éliminées puisque l'on calcule sur les différences, et que les chiffres obtenus le sont dans des conditions identiques pour chaque groupe de liqueurs. ”

“ En effet les globules du sang de cheval se déposent ayec une grande facilité dans le plasma. Or le ferment glycolytique étant contenu dans les leucocytes, il faut que le sucre pénètre ces éléments figurés. Si dans la jugulaire les globules se rassemblent dans ,une extrémité, ils ne détruisent que le glucose du plasma qui les environne et le reste sera inaltéré. ”

“ Par exemple le fluorure de sodium ajouté immédiatement au sang jaillissant du vaisseau, l'empêche de coaguler et en même temps le pouvoir glycolytique
(1) Portier, Sur la glycolyse des différents sucres. C. R., t cxxxi, p. 1217.
est nul. Si l'on n'ajoute le fluorure qu'après quelques instants la glycolyse n'est plus entravée.
Cette expérience est une de celles au moyen desquelles on tentait de démontrer la non-existence du ferment dans le sang circulant.
MM. Lépine et Barrai l'expliquent par l'action du fluorure sur le globule. ”

“ Du sang défibriné comme pour les expériences précédentes est sucré dans la proportion suivante :
Solution de glucose à 50 0/0. 5 c. c.
Sang défibriné. 250 c. c.
On prépara trois fioles :
N° 1 Eau. 2 c. c.Sang glucose. 50 ?2 Eau. 1.5 — Solution d'acide lactique à 10/0. 0.5 — Sang glucose. 50 — N° 3 Solution d'acide lactique à 1 0/0. 2 Sang glucosé. 50 -
On préleva de suite 10 centimètres cubes de chaque pour obtenir les titres initiaux en sucre et l'on abandonna les mélan-
ges au bain-marie à la température de 39-40° pendant six heu res. ”

“ Ces traitements terminés l'on est en présence d'un liquide contenant encore de nombreux produits autres que le glucose. Lesplusgênants sont sans aucun douteles composés azotés, albuminoïdes, leucomaïnes, etc. Ils réagissent pour une part sur les liqueurs cupro-potassiques et viennent fausser les résultats d'une façon d'autant plus fâcheuse qu'ils sont en quantités indéterminées et variables.
La plupart des auteurs ont préconisé des méthodes de purification, mais actuellement le meilleur réactif ”

“ Onpeut néanmoins s'en assurer enajoutant une petite dose de sel dans une portion de liqueur claire, il ne doit pas se former de précipité même après plusieurs minutes.
On filtre le liquide surnageant le précipité, ce der-
(1) Armand Gautier, Préparation et dosage du glycogène.
C. R., 1899, tome cxxix, p. 701.
nier qui est très dense est centrifugé. J'employais une machine à quatre tubes dont chacun présentait une capacité de 50 centimètres cubes environ. Grâce à son poids, toute la masse solide se rassemble rapidement en un culot compact ”

“ R. LÉPINE. — Etiologie et pathogénic du diabète sucré. Reoue de Médecine, 10 octobre.
SPITZER. — Uber der Zuckerzerstorende Kraft des Blutes und der Gewebe. Berlin. Klin. vVochenschr., no 42, p. 949.
1895
DASTRE. — Recherches sur le sucre et le glycogène de la lymphe. G. R., 120, p. 1366.
R. LÉPINE et METROZ. — Sur sa production du ferment glycolvtique. C. R., 120, p. 139.
O. NASSE. —Uber glycolyse. Sitzungsber. d. naturforsehend. ”