Eugène Lambling

“ La nécessité de préparer de l'oxyde de carbone pur et exempt d'air, l'ennui des transvasements de gaz font qu'on préfère généralement se servir de la pompe à mercure, aujourd'hui si répandue et d'un maniement si commode.
L'emploi de la cloche en U de MM. Estor et Saint-Pierre, qui permet de faire l'analyse des gaz en présence du liquide sanguin, simplifie l'opération. Mais ce dosage n'est évidemment qu'approximatif. L'action continue du sang sur l'oxygène, la double lecture du volume gazeux, sont autant de causes d'erreur. ”

“ Il semble bien établi à l'heure qu'il est, qu'à une même richesse en hémoglobine peuvent correspondre des nombres différents de globules, et que, notamment dans certains cas d'anémie, le chiffre normal des globules se maintient, alors que leur richesse en hémoglobine a considérablement diminué. Il est probable que le nombre des éléments figurés influe beaucoup plus sur l'opacité, que leur richesse en matière colorante, si bien que dans les formes d'anémie qu'on vient de citer, le sang ne serait peut-être pas loin de présenter une opacité normale. ”

“ M. Jolyet a démontré que la putréfaction du sang ne modifie pas la capacité respiratoire. J'ai vérifié ce fait à plusieurs reprises. Il constitue une confirmation indirecte des expériences de Hoppe-Seyler, relatives à la résistance de l'hémoglobine à la putréfaction. Mais j'ai constaté que l'agitation à l'air doit durer au moins 20 à 30 minutes. Il est probable qu'une partie de l'oxygène absorbé sert immédiatement à l'oxydation des matières putrides les plus instables. De plus, l'extraction doit être menée plus rapidement que jamais. ”

“ La source lumineuse est la même pour les deux spectres ; pour mesurer l'intensité lumineuse restante d'une région donnée du spectre d'absorption, il suffira donc de rétrécir la moitié supérieure de la fente, jusqu'à ce que dans cette région, le spectre pur soit égal en intensité au spectre d'absorption.
S'il a fallu réduire l'écartement au quart de sa valeur primitive, c'est que
l'intensité lumineuse restante du spectre d'absorption n'est plus que le quart de l'intensité primitive. ”

“ Mais au point de vue physiologique, une hémoglobine ne compte qu'en tant qu'elle absorbe de l'oxygène, et si elle est en partie remplacée par des produits d'altération auxquels ce rôle est refusé, il importe de posséder une méthode de dosage, qui n'englobe pas dans un seul chiffre l'hémoglobine encore intacte et celle qui a perdu son pouvoir respiratoire. ”

“ Mais comme on a d'autre part : c = Ae,
si on a déterminé une fois pour toutes le rapport d'absorption d'une matiere colorante, la concentration inconnue d'une solution quelconque de ce corps s'obtiendra en mesurant son coefficient d'extinction et le multipliant par la constante A.
Tel est le but de l'analyse spectrale quantitative.
Il semble donc que pour déterminer le coefficient d'extinction, et par suite la concentration d'une solution, il suffira de mesurer l'affaiblissement que subit un faisceau de lumière blanche par son passage à travers le liquide. Il n'en est rien. ”

“ Tous les corps oxydants transforment l'oxyhémoglobine en méthémogïobine. Toutefois si le milieu est acide, la décomposition va jusqu'à l'hématine.
D'après Hoppe-Seyler, la méthémoglobine ne serait pas un peroxyde de l'hémoglobine, encore moins un mélange d'hématine et de matière albuminoïde, comme on l'a prétendu. Elle contient au contraire moins d'oxygène que l'oxyhémoglobine, mais plus que l'hémoglobine. Cet oxygène n'est pas faiblement combiné et ne se degage pas dans le vide. ”

“ C'est pour ces raisons que je ne saurais recommander l'emploi des procédés de Worm-Müller, Bizzozero, de Welker, Hayem. Quincke, Mantegazza.
Certes, l'habitude élimine peu à peu une partie des causes d'erreur, mais quel intérêt peuvent présenter des résultats n'exprimant que des grandeurs relatives qu'il est impossible de comparer entre elles, d'un appareil à l'autre, souvent même d'un observateur à l'autre pour le même appareil? ”

“ L'erreur que comporte, dans ce cas, le dosage par voie spectrophotométrique, dépend évidemment du degré de précision avec lequel on mesure le coefficient d'extinction de la solution sanguine, c'est-à-dire l'intensité lumineuse restante. En donnant à l'une des fentes une largeur connue, égale, par exemple, à 100 divisions du tambour, puis s'exerçant à établir l'égalité d'éclairement des deux spectres, on trouve chaque fois, pour l'autre fente, une largeur qui diffère de 100 d'une grandeur représentant l'erreur commise. ”

“ Le procédé de Hoppe-Seyler, modifié par Rajewski, peut certainement fournir des résultats très exacts ; mais comme il exige de temps en temps la préparation de solutions titrées d'hémoglobine, il est difficilement applicable d'une façon courante, même dans un laboratoire, et son usage clinique est tout à fait impossible.
Le procédé de Lesser, fondé sur la mesure de la largeur des bandes d'absorption, ne constitue évidemment qu'un moyen de dosage approximatif; il exige de plus un appareil instrumental assez compliqué, qui m'en a fait rejeter l'emploi. ”

“ De plus, du sang saturé d'air et abandonné à lui-même, ne se trouve pas dans les mêmes conditions que lorsqu'il est soumis à une extraction à la pompe. Dans le premier cas, l'affinité de l'hémoglobine pour l'oxygène, si instable que soit cette combinaison, doit opposer une certaine résistance aux combustions accessoires. Au contraire, dans un sang en voie de réduction par la pompe, l'oxygène sort d'une combinaison et se trouve dans le sein d'un liquide à 60° ou 70°, constamment agité par une ébullition violente. ”

“ Des expériences instituées par M. le professeur agrégé Garnier, m'ont permis de constater que l'intoxication par le chlorate de potasse s'accompagne d'une diminution rapide de la capacité respiratoire ; le sang prend une couleur sœpia, due à la transformation de l'hémoglobine en méthémoglobine qui est incapable de fixer de l'oxygène. Quand la lésion hématique est prononcée, l'aspect du sang avertit qu'il y a décomposition de la matière colorante. ”

“ Si l'on abandonne à l'air, dans un vase cylindrique, une solution de sang, le spectroscope montre, au bout de peu de temps, que le liquide ne contient plus d'oxyhémoglobine, excepté à la surface, dans une couche de quelques millimètres. En effet, l'oxygène absorbé au contact de l'air est incessamment employé à des phénomènes de putréfaction, phénomènes assez rapides pour limiter l'oxydation de la matière colorante, et la confiner dans une mince couche à la surface du liquide. ”

“ C'est à M. Schützenberger qu'est due la découverte du corps qui sert en solution titrée au dosage de l'oxygène dissous.
L'acide sulfureux, qui réduit une foule de corps, est réduit à son tour lorsqu'on fait réagir le zinc sur sa solution aqueuse. On obtient alors une liqueur jaune qui décolore énergiquement l'indigo et le tournesol. M. Schützenberger a montré que la liqueur douée de ces propriétés décolorantes renferme le sel de zinc d'un nouvel acide qu'il nomme hydrosulfureux. Cet acide se forme en effet par la fixation de l'hydrogène sur l'acide sulfureux
anhydre. ”

“ Mais on ne pourra pas négliger cette cause d'erreur, si on opère la saturation du sang dans une atmosphère d'oxygène pur. La pression de ce gaz devenant cinq fois plus forte que dans l'air, la quantité qui s'en dissout dans le plasma est multipliée par ce chiffre et cesse d'être négligeable. ”

“ Il suffit de remplacer le courant d'hydrogène par un courant d'acide carbonique, pour voir s'opérer ce partage de l'oxygène. Mais si on ajoute quelques centimètres cubes de sang à un milieu contenant del'oxygène dissimulé, celui-ci est immédiatement ramené à un état tel qu'il peut de nouveau agir sur l'hydrosulfite.
Or, dans le dosage de l'oxygène du sang, une dilution considérable est évidemment nécessaire, afin de rendre visible la décoloration du réactif employé. ”

“ L'analyse peut se faire soit au moyen des réactifs d'absorption liquides, potasse et acide pyrogallique, soit par la méthode eudiométrique de Bunsen, ou encore en employant les réactifs sous forme solide.
Nawrocki a comparé les résultats fournis par ce procédé à ceux que donne la pompe à gaz. Il a trouvé une concordance parfaite. Ce n'est pas à dire qu'on retrouve exactement tout l'oxygène absorbé par le sang. Le déplacement du gaz n'est complet qu'au bout de 12 à 20 heures, pendant lesquelles les matières organiques consomment nécessairement une certaine quantité d'oxygène. ”

“ On devra, en général, s'abstenir de traduire en hémoglobine les résultats fournis par l'analyse, jusqu'à ce que l'on ait déterminé exactement la quantité d'oxygène que peut fixer l'unité de poids de la matière colorante.
Néanmoins, la détermination de la capacité respiratoire reste du plus haut intérêt clinique, puisqu'elle nous renseigne exactement sur la vraie valeur physiologique du sang.
Les travaux de M. Quinquaud ont suffisamment prouvé que le procédé, quoique délicat, peut être utilisé en clinique. ”

“ La fente du spectroscope est donc partagée en deux moitiés superposées, dont la largeur peut être lue sur les tambours gradués, sans que l'observateur soit obligé de quitter l'oculaire. (Fig. IV.) MESURE DE L'ABSORPTION LUMINEUSE. — Si l'on place devant la moitié intérieure de la fente, une solution colorée, on voit, à écartement égal des deux fentes, deux spectres superposés : l'un, produit directement par la source lumineuse, a conservé toute son intensité : l'autre, correspondant à la moitié inférieure de la fente, a été affaibli par la solution colorée. ”

“ Le sang peut perdre sa capacité respiratoire tout en conservant sa puissance colorante. Saturé d'oxyde de carbone par exemple, il devient incapable de fixer l'oxygène, sans que rien n'avertisse, au colorimètre, de cette modification si profonde. ”

“ Une fois qu'on a dépassé le but, il faut recommencer l'expérience avec un nouvel échantillon de sang. On remédie à cet inconvénient en faisant varier, non pas la concentration du liquide sanguin, mais son épaisseur. On peut se servir, à cet effet, d'un prisme creux dans lequel on introduit le liquide coloré et qui se meut devant la fente du spectroscope, sur une échelle graduée. C'est ainsi qu'ont opéré Quincke et Rajewski.
Je me suis servi, dans mes expériences, d'un lactoscope de Donné. ”

“ Seulement il est regrettable que M. Malassez n'ait pas vérifié l'exactitude de la graduation en déterminant à l'aide de l'hémochromomètre d'une part, et d'une analyse à la pompe à mercure de l'autre, la capacité respiratoire d'une dizaine de sangs de chien.
C'est de cette façon seulement que l'exactitude de l'échelle peut être contrôlée d'une manière sérieuse. On conviendra volontiers qu'une seule détermination d'oxygène ne constitue pas un point de départ assez solide. ”

“ Si l'on emploie le sulfite de soude, il importe de bien chasser tout l'acide sulfureux. Dans le procédé de Pelouze, on ajoute 1 gr. de sulfite à un demilitre de liquide contenant 10 gr. d'acide chlorhydrique. La liqueur est donc peu acide, et j'ai constaté, à l'aide d'un papier iodaté placé à l'orifice de la fiole, qu'un quart d'heure d'ébullition ne suffit pas toujours pour chasser tout l'acide sulfureux. De là la tentation d'ajouter encore de l'acide chlorhydrique, afin de mieux déplacer le gaz sulfureux. ”

“ Or, je n'ai jamais pu apercevoir qu'une seule bande qui, à son maximum d'intensité, allait environ de C 85 D à D 84 E (1) , limites qui se rapportent bien à la bande de l'hémoglobine. En faisant varier l'épaisseur de la solution, on observe tous les phénomènes spectroscopiques propres à cette substance. Néanmoins la solution contenait un peu d'hémochromogène, dont la présence fut constatée par le procédé détourné suivant : On a vu que l'hémochromogène, produit de dédoublement de l'hémoglobine, se transforme très rapidement à l'air en hématine. ”

“ Il compare les chiffres qu'il obtient aux quantités de fer déterminées par Pelouze chez les mêmes animaux, mais sur d'autres échantillons, et il trouve qu'il y a proportionalité.
Il admet donc implicitement que la proportion de fer et d'oxygène est sensiblement constante dans une même espèce.
L'expérience montre qu'il n'en est rien. Il est vrai que M. Quinquaud ne cite chaque fois qu'un seul chiffre d'oxygène pour l'homme, le bœuf et le canard. ”

“ En second lieu, il faut distinguer, comme le fait remarquer M. Malassez, la qualité de ton et la valeur de ton. « Un rouge, par exemple, peut être plus ou moins violacé, plus ou moins orangé, c'est sa qualité de ton. Il peut être plus ou moins lumineux, tout aussi lumineux qu'un violet, c'est sa valeur de ton. Quand l'hémoglobine est oxygénée au maximum, elle a toujours la même qualité de ton; sa valeur de ton seule varie alors avec la quantité ». ”

“ L'hémoglobine oxygénée ou réduite est la seule matière colorante rouge du sang. Vierordt, qui a étudié le premier d'une manière exacte le spectre
d'absorption du sérum, a montré combien est minime le pouvoir absorbant de ce liquide dans les différentes régions spectrales, et principalement dans la région D-E, où l'action exercée par l'oxyhémoglobine atteint son maximum.
Cette matière colorante n'existe que dans les globules rouges. Elle constitue les 9/10° de leur poids à l'état sec. Un litre de sang humain en contient environ 120 à 140 gr. ”

“ Il est probable que le picro-carminate, tout en restant transparent, avait subi des changements de coloration notables que je rattache à une lente infiltration d'air dans le prisme. C'est là un des grands inconvénients de l'emploi de cette substance comme couleur étalon : elle peut subir, à l'insu de l'observateur, une lente altération qui fausse peu à peu les résultats. Il ne faut donc avoir, en général, qu'une confiance limitée dans tout appareil où le picro-carminate sert de couleur type, et vérifier fréquemment la graduation en répétant les expériences qui ont servi de point de départ. ”

“ Koerniloff et Leichtenstern ont montré que cette addition a pour effet de diminuer légèrement le coefficient d'extinction, c'est-à-dire la quantité de lumière absorbée. La différence qui est surtout sensible pour des sangs de leucémiques, tient à ce fait que la soude augmente la limpidité du liquide en dissolvant les corpuscules graisseux en suspension.
Le dosage de la matière colorante doit se faire à l'état d'oxyhémoglobine; mais il est inutile d'agiter la solution à l'air. L'eau qui a servi à la dilution contient une quantité d'oxygène amplement suffisante pour oxyder toute l'hémoglobine. ”

“ La bande unique de l'hémoglobine est seule visible. Puis le liquide se trouble, prend une teinte jaune sale, et le spectroscope décèle la présence de quantités croissantes d'hématine. A l'ouverture du tube, le liquide est examiné sous des épaisseurs variables. On constate qu'il ne contient plus que des traces d'hémoglobine. La transformation en hématine est presque totale.
L'action prolongée de l'indigo blanc sur la matière colorante du sang produit donc finalement de l'hématine. Cette décomposition se produit-elle déjà durant les quelques minutes nécessaires au dosage. C'est peu probable. ”

“ Malheureusement la solution normale de matière colorante ne se conserve pas pendant plus de huit jours; sa préparation exige beaucoup de temps et ne peut se faire commodément qu'en hiver.
Rajewski (loc. cit.) a essayé de remédier à cet inconvénient en remplaçant la liqueur normale d'hémoglobine par une solution de picro-carminate d'ammoniaque beaucoup moins altérable. En faisant varier les proportions de carmin et d'acide picrique, on arrive, par tâtonnements, à un liquide ayant la même valeur de ton et la même nuance qu'une solution titrée d'hémoglobine. ”

“ Si l'on retourne le tube, et si l'on examine au spectroscope le liquide qui s'écoule le long des parois, on voit que les raies de l'oxyhémoglobine ont été remplacées par la bande unique de l'hémoglobine. A partir de ce moment les phénomènes spectroscopiques restent les mêmes pendant plusieurs années.
Des solutions d'oxyhémoglobine pure peuvent se conserver intactes à l'état d'hémoglobine, si on empêche tout accès de l'air. Citons ici une des expériences de Hoppe-Seyler: Une solution d'oxyhémoglobine de chien pure est enfermée dans des tubes scellés. ”

“ L'expérience montre que le vide seul est insuffisant pour dégager complètement les gaz dissous dans l'eau. Une ébullition de quelques instants est nécessaire pour chasser tout l'oxygène que l'eau paraît retenir avec une affinité toute spéciale. A plus forte raison faut-il chauffer quand, à cette affinité, vient s'ajouter l'attraction que des matières organiques doivent exercer sur l'oxygène. ”