Edmond Bonjean

“ Il n'y a généralement aucun rapport entre la matière organique et ce chiffre qui représente l'ensemble des produits volatils constitués par l'eau, l'acide nitrique des nitrates décomposés (remplacé il est vrai par de l'acide carbonique) , les chlorures volatisés, etc., la matière organique. Dans certains cas, on constate la réduction partielle des sulfates. C'est le résidu à 110 degrés qui est le plus constant. Sur ce résidu on dose les éléments suivants : silice, oxyde de fer, alumine, chaux, magnésie, soude, potasse. ”

“ Rien n'est plus fantaisiste que les chiffres donnés par les auteurs qui déduisent les poids de chaux, de magnésie, d'acide sulfurique, d'acide carbonique, etc.., par le calcul et l'interprétation des quatre degrés hydrotimétriques. ”

“ On évapore à siccité au bain-marie 10 centimètres cubes de l'eau à analyser et 10 centimètres cubes de la solution de nitrate de potasse dans deux becher-glass. Après refroidissement on laisse tomber dans chaque vase 1 centimètre cube du réactif sulfo-phéniqué ; on mélange bien exactement avec le résidu de l'évaporation, à l'aide d'un petit agitateur. On ajoute 5 centimètres cubes d'eau distillée et 10 centimètres cubes d'ammoniaque au tiers. On a ainsi deux solutions dont la teinte est proportionnelle à la quantité de picrate d'ammoniaque, par conséquent à leur teneur en nitrates. ”

“ On recueille le liquide filtré et les eaux de lavage dans une fiole à fond plat, et dans une capsule de platine ou de porcelaine dans le cas où l'on se propose de doser les alcalis.
Oxyde de fer et alumine.-Dans ce liquide filtré dont le volume est d'environ 200 centimètres cubes on ajoute de l'ammoniaque pure jusqu'à réaction nettement alcaline, on porte à l'ébullition. S'il y a un précipité on chasse presque totalement l'ammoniaque, laisse reposer au bain-marie, filtre, lave à l'eau bouillante, sèche, incinère et pèse. ”

“ On retire chaque fiole avec soin en évitant de toucher les bords ; on flambe le goulot et le bouchon, et on prélève les tubes dans ces flacons, en chauffant fortement la pointe de ces tubes et les plongeant rapidement dans l'eau, ce qui amène la rupture de l'effilure et le remplissage du tube. On se sert encore plus facilement et avantageusement de ces flacons lorsqu'il s'agit de prélever l'eau au robinet d'une canalisation ou à un écoulement quelconque. Dans ce cas, il faut avoir le soin de flamber le robinet ou l'extrémité du tuyau d'écoulement avant de procéder à la prise des échantillons. ”

“ C'est celui de l'eau, après ébullition, privée théoriquement des gaz dissous et du carbonate de chaux dissous à la faveur de l'acide carbonique. En réalité, le précipité se compose de carbonate de chaux, carbonate de magnésie, sulfate de chaux, suivant la teneur des eaux en ces différents produits.
Cent centimètres cubes de l'eau sont portés à l'ébullition pendant 10 minutes: on refroidit, complète à 100 centimètres cubes avec de l'eau distillée bouillie, agite, et filtre. On prend le degré hydrotimétrique dit permanent du liquide filtré. ”

“ On verse dans l'entonnoir un volume parfaitement exact de 4 ou 5 centimètres cubes (i) de solution de sulfate ferreux ammoniacal ; on les fait écouler dans l'eau ; on ajoute ensuite de la même façon 3 ou 4 centimètres cubes (i) de lessive de soude que l'on fait écouler à l'intérieur de la pipette : l'hydrate ferreux est précipité, et une quantité proportionnelle au volume d'oxygène dissous dans l'eau passe à l'état d'hydrate ferrique : on laisse en contact une demi-heure. ”

“ On recueille le liquide condensé - dans une fiole conique renfermant 20 centimètres cubes d'acide sulfurique (a) additionnés de quelques gouttes de solution alcoolique de phénolphlaléine, dans lequel plonge, dès le début, l'extrémité effilée du réfrigérant. On prépare un témoin avec les mêmes quantités d'eau distillée bouillie, d'acide et de phénolphtaléine. On dose avec la solution de soude (6) le témoin et l'épreuve, en prenant les précautions de faire bouillir et refroidir les solutions acides avant les titrages (voir azote organique) . ”

“ On ajoute une pastille de potasse caustique : il se forme souvent un précipité de chaux et de magnésie qu'il n'est pas nécessaire de séparer, on ajoute 2 centimètres cubes du réactif de Nessler, qui produit un précipité ou une coloration jaune brun d'autant plus foncée qu'il y a une quantité d'ammoniaque plus grande. ”

“ D'ailleurs, nous estimons que dans les cultures en bouillon ordinaire dans les fioles Pasteur remplies, soit en partie, soit jusqu'au goulot, le milieu de culture devient très rapidement et toujours énergiquement réducteur, comme il est facile de s'en convaincre, sous l'influence des germes aérobies toujours prépondérants
dans les eaux et si avides d'oxygène ”

“ On chasse totalement celui-ci et les sels ammoniacaux formés par double décomposition en chauffant la capsule de platine sans atteindre même le rouge sombre. On laisse refroidir dans le dessiccateur et pèse.
Dans cette opération, on a restitué aux carbonates alcalino-terreux l'acide carbonique total et transformé les oxydes alcalino-terreux provenant de la décomposition des nitrates en carbonates.
Perte au rouge. La différence entre le résidu à 110 degrés et le résidu après calcination et reprise par le carbonate d'ammoniaque représente la perte au rouge. ”

“ Étant en contact avec le sol, pouvant être exposées à recevoir les poussières atmosphériques, les résidus de tous les organismes sains ou malades, les déchets de toutes provenances, industries, hôpitaux, laboratoires, etc., etc., les eaux peuvent devenir le véhicule de tous les germes de la nature pour lesquels elles constituent un terrain plus ou moins favorable à leur entretien, à la conservation de leur énergie ou virulence, à leur prolifération. ”

“ Il faut avoir bien soin de mettre chaque point de la surface intérieure de la fiole en contact avec l'acide et de l'y laisser séjourner quelque temps pour être parfaitement sur de la destruction complète de tout germe: 20 à 25 centimètres cubes d'acide sulfurique du commerce sont largement suffisants pour une fiole de la contenance indiquée. ”

“ Une stérilisation insuffisante des milieux gélatinisés (gélatine ordinaire, Elsner, artichaut, etc.) peut être aussi préjudiciable qu'une stérilisation exagérée : dans un cas les tubes cultivent, dans l'autre cas la gélatine ne se solidifie pas et devient infertile même après ensemencement.
Enfin, dans toutes les opérations d'ensemencement et d'examen,
il faut prendre toutes les mesures possibles pour travailler dans des endroits calmes et à l'abri des poussières atmosphériques et autres. ”

“ On a ainsi obtenu un récipient partiellement vide d'air, en raison de la dilatation du gaz à la température à laquelle le tube a été porté, et absolument stérilisé.
Pour prélever l'échantillon, on trace un trait avec le couteau à verre ou une lame de bon acier aiguisée sur l'une des effilures, on la passe à plusieurs reprises dans la flamme d'une lampe à alcool, on la plonge dans l'eau à analyser à quelques centimètres au-dessous de la surface libre, et on brise la pointe à l'endroit du trait, à l'aide d'une pince flambée dans la flamme de la lampe à alcool, avant de la plonger dans l'eau. ”

“ Les produits définis d'origine végétale, tels que sucre cristallisé, glucose, dextrine, acide tartrique et les macérations de produits végétaux absorbent d'une façon constante bien plus d'oxygène en solution acide qu'en solution alcaline. Certains produits organiques d'origine animale ont peu d'action sur le permanganate de potasse en solution acide ou en solution alcaline. Telles l'urée et l'albumine d'œuf: une solution renfermant 1 gramme d'urée par litre absorbe à peine d'oxygène en solution acide et peu en solution alcal ine. ”

“ Stériliser une deuxième fois à l'autoclave.
Sérum de cheval immunisé contre le bacille typhique ou de tout autre animal sensible à cette réaction. On conserve ce sérum dans de petites pipettes que l'on emploie au fur et à mesure des besoins.
Ensemencements. Dès que les échantillons sont arrivés dans de bonnes conditions au laboratoire, c'est-à-dire lorsque les échantillons destinés à l'examen bactériologique sont encore entourés d'une certaine quantité de glace, on les met immédiatement en œuvre.
Le matériel suivant doit être prêt sous la main : 1 fiole de 100 centimètres cubes de bouillon. ”

“ La détermination des espèces de tous les germes présents dans une eau, au moment où les échantillons ont été prélevés, est l'opération la plus difficile, la plus pénible et la plus longue des analyses, c'est aussi la partie la plus importante, surtout 'en raison de la spécification des bactéries pathogènes. ”

“ Les colonies qui cultivent dans ces conditions appartiennent à un très petit nombre d'espèces, souvent deux ou trois, quelquefois quatre, très rarement à un plus grand nombre.
Un examen microscopique minutieux des colonies et des prépations faites avec un prélèvement de ces colonies permet d'éliminer de suite un certain nombre de ces espèces représentées par des coccus (coccus ureæ, coccus candicans, coccus plumosus) ou de forts bacilles (bacillus acidi laclici, b. albus, b. fluorescens long us, b.
urese) impossibles à confondre avec le bacille-coli ou le bacille typhique. ”

“ Dans le cas où l'on veut faire cette détermination il suffit de reprendre le précipité pesé par l'acide chlorhydrique pur ou par la solution de 8 parties acide sulfurique dans 3 parties eau, en chauffant au
bain-marie jusqu'à dissolution totale. On fait un volume déterminé avec de l'eau, ajoute quelques rognures de zinc distillé; on laissfeen contact jusqu'à épreuve négative avec le succinate d'ammoniaque, on filtre rapidement sur un linge. On prélève une partie aliquote que l'on titre au permanganate de potassium. ”

“ Tout en étant la plus importante -des recherches analytiques, l'examen bactériologique constitue le travail le plus difficile, le plus délicat et le plus long de l'examen des eaux.
Procédés de G. Pouchet et Ed. Bonjean. Les recherches bactériologiques comprennent les opérations suivantes : 1° Ensemencements généraux en vue de la numération, de la spécification et des recherches des germes pathogènes ; 2° Numération; 3° Spécification; 4° Recherche générale des espèces pathogènes ou suspectes et des associations dangereuses ; expérimentation physiologique ”

“ Le bassin d'une source d'eau très pure existant au milieu des champs peut être le réceptacle d'une infinité d'algues, infusoires, corps étrangers de toutes sortes apportés par les animaux fréquentant cette eau, par les poussières atmosphériques, les oiseaux, etc., etc.,., et un captage soigné de la source a facilement raison de toutes les causes accidentelles d'introduction de ces corps étrangers ”

“ La personne chargée des prélèvements est obligée généralement de lutter contre le zèle des assistants éventuels qui s'efforcent à lui faciliter la tâche, sans se soucier des altérations qu'ils peuvent faire subir inconsciemment à l'eau qui doit être prélevée. ”

“ On conçoit aisément qu'il est bien difficile, et on peut même presque dire impossible, de laisser échapper les indices permettant d'établir qu'une eau est contaminée lorsqu'elle a été soumise à toute cette série d'investigations. ”

“ L'appareil se compose d'un ballon ou d'une fiole à fond plat de 2 litres fermé par un bouchon de caoutchouc percé de deux trous: dans l'un passe la tige d'un entonnoir à robinet, dans l'autre un tube à dégagement relié à un réfrigérant : on fixe à l'extrémité du réfrigérant un tube à bout effilé. On introduit dans le récipient 1.5oo centimètres cubes d'eau et un lait de 10 grammes de magnésie calcinée que l'on a eu Je soin de faire préalablement bouillir. ”

“ Généralement la dilution de i goutte de culture dans 10 centimètres cubes de bouillon est suffisante; en prenant une goutte de cette dilution pour 10 centimètres cubes de gélatine Elsner, on obtient des cristallisoirs dont le nombre de colonies n'est pas exagéré. ”

“ Pipettes effilées à numération donnant de 3o à 5o gouttes par centimètre cube, enfermées dans un tube en verre recouvert de coton, le tout stérile.
Bain-marie de G. Pouchet pour fusion des tubes de gélatine.
Numérateur à secteur de Ed. Bonjean que l'on peut fabriquer soi-même à l'aide d'un carton blanc en inscrivant des circonférences d'un diamètre égal à celui des Pétri et des fioles Gayon et en découpant des secteurs d'une surface représentant 1/20, 1/10, i/5 de la surface totale des cercles. On fixe le numérateur ainsi préparé sur une feuille noire. ”

“ Expérimentation physiologique (i) .
On laisse à l'étuve à 36 degrés pendant huit jours le bouillon non phéniqué renfermant 3o à 4o centimètres cubes d'eau.
Au huitième jour, à l'aide de cette culture, on pratique sur un cobaye une injection intra-péritonéale de o cc. 3 à o cc. 5 p. ioo du poids de l'animal. Il est important de ne pas s'écarter de ces chiffres dont la fixation est le résultat de très nombreuses expériences. ”

“ On ajoute ensuite 5o grammes de peptone et 20 grammes de glycérine et on complète le volume à 10 litres. Le collage est inutile, on divise par flacons de 2 litres que l'on chauffe à l'autoclave pendant 1/2 heure. Le liquide filtré de nouveau est divisé par doses de 10 et 100 centimètre cubes dans des matras Pasteur stérilisés de 5o et 3oo centimètres cubes. Définitivement, on stérilise à l'autoclave (1/2 heure à 120°) et on conserve pour l'usage.
Solution de peptone. Peptone susceptible de bien donner la réaction de l'indol : 20 grammes. ”

“ Un degré hydrotimétrique équivaut pour un litre d'eau à :
Chaux en CaO. 5 mill. 7 Carbonate de chaux en Ca CO' 10 3 Sulfate de chaux en CaSO1 14 o Magnésie en MgO 3 6 (Courtonne) Carbonate de magnésie en Mg COI 7 6 Sulfate de magnésie en Mg S O* 10 8 Nitrate de chaux en (AzOa) '^Ca.. 17 o (Dimitri)
IV. EXAMEN MICROGHAPHIQUE On peut rencontrer dans les eaux exposées au libre contact de l'air une multitude de substances étrangères, banales ou offensives, en suspension ou dans des dépôts ”