Louis Félix Henneguy

“ Tout en étant d'avis qu'il n'existe pas de colorations « vitales » proprement dites, je me hâte cependant de dire que l'emploi de solutions colorées inoffensives dans l'étude des cellules vivantes est souvent d'une utilité réelle. On trouvera souvent avantage à broyer un peu de gentiane, de dahlia, de brun Bismarck ou de bleu de méthylène dans un liquide « indifférent » et à s'en servir pour l'observation de cellules des tissus. Le bleu de méthylène offre l'avantage d'être amplement soluble dans l'eau de mer, ce qui permet de l'employer pour l'étude d'organismes marins. ”

“ Les solutions aqueuses ne s'emploient qu'en combinaison avec l'alun, qui sert de mordant. Par leurs propriétés, elles ressemblent en tous points au carmin à l'alun, si ce n'est qu'elles produisent souvent des colorations plus richement nuancées. Mais la propriété la plus importante de la cochenille nous parait être sa solubilité dans l'alcool, qui nous met entre les mains une teinture qui est aussi précise, aussi pénétrante et aussi élective que l'hématoxyline de Kleinenberg, et qui a sur celle-ci l'avantage d'être parfaitement stable. ”

“ L'acide chromique est un durcissant de premier ordre ; son grand défaut est la facilité avec laquelle il rend les tissus cassants.
Les solutions d'acide chromique ne sont pas très pénétrantes, il convient donc d'employer des objets aussi petits que possible. Et pour cette raison aussi, il conviendra le plus souvent de ne pas employer l'acide chromique pur, mais l'un des mélanges avec l'acide acétique, l'acide osmique, l'acide picrique, l'acide nitrique, que nous allons décrire plus bas. ”

“ Il n'y a pour nous de liquide vraiment indifférent que le plasma qui baigne les cellules dans l'individu même d'où on les extrait. Ensuite parce que la possession de notre méthode de contrôle rend très souvent l'observation sur le vivant inutile à celui qui possède la pratique d'un genre donné de cellules.
Dans le cas d'une observation exceptionnellement délicate, ce n'est pas à ces sérums qu'il faut recourir, c'est au plasma naturel, du même individu, tenant en solution du vert de méthyle, du brun Bismarck ou d'autres matières colorantes en proportion minime. ”

“ Pour fixer un objet dans une solution quelconque, il va sans dire qu'on le plonge dans le liquide et qu'on l'y laisse jusqu'à ce que la réaction soit accomplie. Nous indiquons ici quelques précautions à prendre.
Il faut veiller avec soin à ce que les tissus, les éléments ou les organismes soient parfaitement vivants au moment de les fixer ; si on les laisse mourir avant de les exposer à l'action de l'agent fixateur, on ne fixe que des états pathologiques, ou des altérations post mortem. ”

“ Nous avons déjà dit que le carmin à l'alun est, de tous les carmins, le réactif le plus délicat dans ses résultats. C'est un colorant nucléaire presque absolument pur. En dehors de la chromatine des noyaux, il n'y a guère que les nucléoles et la substance contractile des muscles striés qui s'y colorent. Ce carmin présente le grand avantage qu'on peut laisser les préparations indéfiniment dans les solutions sans crainte de voir se produire des surcolorations. Les colorations sont stables dans le baume et dans la glycérine neutre ; elles le sont moins dans la glycérine acidulée. ”

“ Les solutions d'hématoxyline dans l'eau et dans l'alcool sont rouges ou rouge-brun; l'addition d'alun ou d'alcali les fait passer au bleu ou au violet: les acides font rougir ces dernières, et font passer les premières au jaune ; tandis que la combinaison de l'hématoxyline avec les sels chromiques est noire ou noirâtre.
Aucune de ces solutions n'est parfaitement stable; et l'un des plus grands inconvénients de l'hématoxyline consiste en l'impossibilité de préparer des solutions colorantes ayant toujours une action égale sur les tissus. ”

“ L'acide picrique, en solution concentrée ou diluée, est un bon agent de fixation; il gonfle quelquefois légèrement le noyau, mais il conserve bien les figures karyokinétiques. Il vaut mieux employer des solutions fortes que des solutions faibles. Les sels picriques (de potasse, de soude ou de baryte) ne valent rien pour les études cytologiques.
L'alcool exerce sur les cellules à peu près la même action que l'acide chromique, mais il ratatine plus souvent les noyaux.
Le chlorure d'or conserve bien la forme des cellules, mais n'agit pas, en général, sur le noyau. ”

“ C'est bien là le rôle que joue l'alun dans les solutions d'hématoxyline et dans le carmin aluné. Rappelons enfin que le rôle de mordants est quelquefois joué par des substances qui se trouvent dans les teintures d'une manière accidentelle. Ainsi, il paraît établi que l'énergie et l'électivité supérieures que possèdent les solutions vieilles de carmin ammoniacal sont dues à la présence de traces de carbonate d'ammonium, substance qui s'y forme à la longue par suite de l'absorption par la solution de faibles quantités de l'acide carbonique de l'air. ”

“ Toutes les fois qu'on désire conserver sous leur aspect véritable les structures nucléaires et les figures de la division nucléaire, de la manière éminemment précise dont les conservent les liquides chromiques, et que de plus on désire avoir les structures, ainsi conservées, colorées d'une façon à la fois très énergique et très précise, cette méthode mérite d'être préférée à toute autre. ”

“ On trouve assez souvent dans le commerce du prétendu vert d'iode qui n'est autre chose que du vert de méthyle. On peut s'assurer si la couleur contient de l'iode de la manière suivante : on traite une petite portion de la couleur en nature avec de l'acide sulfurique, et l'on ajoute quelques fragments de bichromate de potasse; l'iode, mis en liberté, se dégage sous forme de vapeurs violettes. On peut aussi le démontrer par le chloroforme ou le sulfure de carbone. ”

“ Pour des objets bien fixés, l'alcool à 70 p. 100 est un excellent liquide à employer en premier lieu. De petits fragments de tissus perméables, comme les muqueuses, peuvent être durcis suffisamment en vingt-quatre heures; la moelle et le cerveau demandent de longues semaines.
Nous pouvons dire de l'alcool que, employé seul, il est en général de beaucoup inférieur à la plupart des autres réactifs durcissants; mais que, employé pour faire suite à un bon fixateur et en compléter l'action, il rend des services inappréciables. ”

“ Ajoutons que, si dans les études faciles — dans cette anatomie microscopique qui est presque de l'anatomie macroscopique — on peut se servir de méthodes simples et peu variées, il en est tout autrement dans les recherches vraiment délicates. Là, il ne saurait être question de copier les méthodes imaginées par les autres ou par soi-même ; car — c'est une vérité incontestable — chaque objet demande un traitement différent. On n'est histologiste qu'autant qu'on a acquis le don de deviner la diversité du traitement approprié à chaque objet d'étude ”

“ L'essence de bois de cèdre réunit à un haut degré les bonnes qualités de tous ces éclaircissants. Elle pénètre avec non moins d'énergie que l'essence de girofle; elle conserve admirablement les caractères les plus délicats des cellules; elle se mêle facilement à la paraffine; et elle ne rend pas les tissus cassants, même après un séjour prolongé. Depuis que nous avons appris à connaître les propriétés de cette essence, nous l'employons à titre de liquide normal de pénétration pour les inclusions, et nous la recommandons particulièrement pour cet usage. ”

“ Nous dirons cependant qu'il y a quatre de ces réactifs qui sont généralement employés pour les travaux ordinaires d'anatomie microscopique et d'embryologie : ce sont -"
l'acide osmique pour les petits objets; et, pour les pièces plus volumineuses, l'acide picrique (sous forme de liqueur de Kleinenberg) , le sublimé corrosif, et l'acide nitrique d'Altmann. Nous ajouterons que, pour notre part, nous mettrions volontiers dans cette catégorie le mélange chromo-acéto-osmique de Flemming (formule modifiée de Fol, n° 19) ; c'est un réactif qui mérite toute confiance. ”

“ Le perchlorure de fer produit par imprégnation des colorations fort utilisables. C'est une méthode extrêmement facile à appliauer, et qui peut parfois rendre des services précieux; nous estimons qu'elle mérite d'être mieux connue. Elle consiste à imbiber les objets par une solution de perchlorure de fer, et à les mettre ensuite dans une solution faible d'acide tannique, gallique ou pyrogallique, jusqu'à ce qu'ils soient suffisamment noircis. ”

“ SEILER (Proc. Amer. Soc. Mic., 1881, p. 60) recommande de prendre du baume de Canada réduit à l'état sec par évaporation comme nous l'avons dit, de le dissoudre dans de l'alcool absolu chaud, et de filtrer à travers de la ouate. Cette solution aurait, selon Seiler, l'avantage que, comme elle nous met à même d'y porter les objets directement de l'alcool absolu sans traitement par une essence ou autre agent éclaircissant, on évite le ratatinement des tissus causé par l'emploi des agents éclaircissants, et l'on évite aussi la dissolution des parties graisseuses des cellules. ”

“ Mettant en œuvre des procédés d'infiltration, on réussit aujourd'hui à remplir avec la masse d'inclusion toutes les cavités qui peuvent exister dans un organisme, à entourer chaque organe et chaque élément, et à en pénétrer même la substance des cellules. ”

“ Pour les fixer, Schœllibaum chauffe le porte-objet à une douce chaleur sur un bain-marie jusqu'à évaporation de l'essence de girofle, ce qui a lieu en cinq à dix minutes. Nous pouvons assurer qu'on arrive au but bien plus simplement et tout aussi sûrement en tenant le porte-objet au-dessus de la flamme d'un bec de Bunsen ou d'une lampe à alcool jusqu'à ce que la paraffine soit fondue et que l'essence de girofle se soit rassemblée en larmes entre les coupes, ce qui arrive en quelques secondes ou, au plus, en une demi-minute ; il est tout à fait inutile de faire évaporer l'essence. ”

“ Le meilleur agent pour fixer, en général, les cellules, soit à l'état de repos, soit en voie de division, est, d'après FLEMMING, le mélange chromo-acéto-osrnique. Si, dans ce liquide, on ne met pas d'acide chromique, on n'obtient pas de bons résultats. Si l'on supprime l'acide acétique (comme dans la formule de Max Flesch) , les figures nucléaires apparaissent bien moins nettement. La présence de l'acide
acétique ou de l'acide formique dans les solutions osmiques favorise la précision de la coloration ultérieure par le picro-carmin, l'hématoxyline et le violet de gentiane. ”

“ Toutes les fois que l'on désire transporter un objet dans un liquide d'une densité différente de celle du liquide où il se trouve, il est important que le changement se fasse aussi graduellement que possible. ”

“ L'inclusion à la gomme offre quelques avantages qui sont, dans certains cas, d'une grande importance. Les objets sont enrobés dans une masse transparente ; ils ne sont, en aucune façon, privés de leur eau naturelle ; et ils ne sont pas soumis à l'action de la chaleur. Pour les travaux ordinaires, les masses à la gomme ne sauvent certes pas entrer en concurrence avec la paraffine et le collodion ; mais, pour des tissus très délicats et en même temps très riches en eau, comme le sont ceux des Cœlentérés, elles peuvent rendre de grands services. ”

“ Les mêmes organes d'animaux un peu plus gros (Chat, Lapin) ne demanderont pas non plus de méthodes spéciales; on peut les fixer et durcir dans une solution d'un bichromate — liquide d'Erlicki de préférence, — laver à l'eau, longuement, colorer par les méthodes usuelles, ou bien faire l'inclusion dans le collodion et colorer les coupes soit par le carmin à l'alun, le carmin à l'ammoniaque, ou une autre teinture ordinaire, eu bien par l'hématoxyline de Heidenhain ou par celle de Weigert, si l'on désire mettre surtout en évidence les cellules ou les trajets nerveux. ”

“ Pour les coupes, on durcit ensuite par le bichromate de potasse suivi d'alcool, on fait les coupes par la celloïdine, et, sans les colorer, on les monte dans la glycérine. C'est la méthode des coupes qui donne les préparations les plus instructives. Si l'on désire contrôler par des dissociations les résultats qu'elle donne, il faut faire macérer un ganglion, fixé par l'osmium, pendant trois à quatre jours ou plus dans un mélange de glycérine et d'acide acétique concentré ; — il suffira de vingt-quatre heures de macération si l'on tient la préparation à une température de 35 à 40 degrés. ”