Georges Rubenthaler

“ Il y a peu à dire du prélèvement des végétaux, si ce n'est que leurs tissus se fanent très rapidement et doivent, à cause de cela, être immergés dans le fixateur à l'instant précis où ils sont séparés de leur support. En outre, certaines pièces, comme les fleurs, les étamines, sont d'une fragilité extrême et demandent à être laissées au repos, au moins au début de la fixation.
Pour les tissus animaux, la nécessité de les mettre tout d'abord à découvert, en respectant leur vie le plus longtemps possible, complique le plus souvent la technique en exigeant la vivisection. ”

“ Le poumon est particulièrement difficile à prélever à l'état physiologique. Un procédé réellement efficace consiste à se procurer des fœtus de petits mammifères à terme et à les noyer, après les avoir laissés respirer quelque temps, dans un liquide fixateur. Les préparations ainsi obtenues sont les seules parfaites au point de vue du développement des alvéoles, de l'expulsion de l'air et de la pénétration des milieux d'inclusion. ”

“ Les dégâts volontairement effectués seront toujours moins étendus que ceux qui résultent d'une inclusion défectueuse et incomplète.
La durée de la fixation a été suffisamment définie pour chaque fixateur. En cas de doute, on saura qu'il y a moins d'inconvénients à prolonger la fixation qu'à la réaliser d'une manière insuffisante. Toutefois ce principe, généralement vrai, n'est applicable ni à l'acide osmique ni au sublimé, qui rendent les pièces extrêmement friables. Les fixations à la paraffine réclament, toutes choses égales d'ailleurs, une fixation plus solide, partant plus prolongée. ”

“ NUMÉRATION TOTALE DES GLOBULES BLANCS. — Elle se fait à l'aide de l'hématimètre et de la cellule de 1/5 de millimètre de hauteur. Lorsqu'on a mis au point sur les globules rouges, il suffit, pour apercevoir les globules blancs qui sont plus épais, de relever progressivement l'objectif avec la vis micrométrique. La numération s'effectue alors comme celle des globules rouges, en tenant compte que le nombre beaucoup plus faible des globules blancs (7 000 par millimètre cube) commande de compter un beaucoup plus grand nombre de carrés. ”

“ On peut assurer en vingt-quatre heures la fixation solide d'une pièce de 2 centimètres cubes. La coloration jaune communiquée aux tissus permet d'ailleurs de surveiller la pénétration. Tout en se prêtant aux usages les plus divers qui en font un fixateur presque universel et, entre autres, à la décalcification des os minces, le réactif de Bouin est un fixateur de choix pour les structures glandulaires, où il conserve bien les grains de sécrétion. Il respecte les épithéliums et les cils vibratiles dans leur intégrité, mais réussit moins bien avec le rein et le testicule des mammifères. ”

“ Réalisation de la netteté de l'image. — La netteté de l'image est réalisée par un ensemble de conditions touchant la nature de la lumière, la disposition de l'appareil d'éclairage et de ses diaphragmes, la propreté de la préparation et celle des lentilles, la longueur du tube, l'exactitude de la mise au point et l'état de la réfraction de l'œil observateur.
Nature de la lumière. — La lumière employée est naturelle ou artificielle. ”

“ Natura non facit saltus, faisant table rase de la sensibilité de la matière vivante et des réactions qu'elle oppose aux agents extérieurs, cette méthode de fixation, si méthode il y a, inflige en réalité à la cellule vivante le changement de condition le plus violent, le plus ignoré de la nature qu'on puisse imaginer. Malgré cette violence, aucun trouble structural ne pourrait se produire si la fixation était assez puissante pour tuer instantanément les tissus, y empêchant toute modification dès l'instant précis du contact. ”

“ Dans chaque tube, on laisse tomber une goutte de sang, et le premier dans lequel le microscope permet de décèler la destruction des globules fournit le titre de la solution qui exprime la résistance.
Globules blancs. — Dans l'examen du sang à l'état vivant, les globules blancs sont à observer au point de vue de leur mobilité. Il est à noter que les lymphocytes
sont dépourvus de mouvements; il n'est donc pas étonnant de constater l'immobilité des globules blancs dans la leucémie, puisque dans cette affection l'immense majorité des globules blancs est composée de lymphocytes. ”

“ Les imprégnations, qu'elles aient recours ou non à l'usage préalable ou simultané d'un réactif fixateur, ne sont au fond que des procédés de fixation jouant le rôle de procédés de coloration.
Le nitrate d'argent, qu'on emploie si souvent aujourd'hui pour les imprégnations des tissus nerveux, est à la fois colorant et fixateur. Il suffit à mettre en évidence la karyokinèse, les cellules fixes du tissu conjonctif, etc. ”

“ Si on n'a pas de lame à cellule, il est bon de ne pas appuyer sur la lamelle qui doit être posée très délicatement et de choisir une lamelle assez épaisse pour qu'elle ne se déprime pas sous l'influence de la capillarité.
La phagocytose s'observe en ajoutant à la lymphe une gouttelette de sérum physiologique dans laquelle on aura préalablement broyé une parcelle de vermillon.
On voit alors, en un temps variable, les globules blancs s'incorporer les grains de vermillon. ”

“ L'analyse chromatique permet non seulement de reconnaître dans un organe ses différents tissus constitutifs, et en particulier toutes les variétés de tissus conjonctifs, mais elle permet encore, dans chaque élément de tissu, c'est-à-dire dans les cellules, de reconnaître ses parties constituantes, le noyau, le protoplasma et; dans ce dernier, par exemple, certaines granulations caractéristiques dont l'étude a pris, il y a peu d'années, pour les cellules glandulaires et les globules blancs, un développement considérable. ”

“ Leur présence tient à l'introduction dans le milieu liquide de la préparation de particules ultramicroscopiques, reconnaissables à ce qu'elles ne prennent jamais de coloration et restent seules animées de mouvements quand tout a été tué par la fixation, ces particules ne devant pas leur visibilité à leurs dimensions réelles, mais à l'éclairage qui leur vient des rayons obliques ou de la tranche de la lame. ”

“ En outre, chaque fois que l'isotonie se modifie, l'hématie met en liberté une quantité d'hémoglobine qui est sensiblement proportionnelle à la différence entre l'isotonie du globule et celle du milieu où il est placé.
A un moment donné, le globule se détruit entièrement, et c'est le degré de concentration de la solution saline à ce moment qui sert de mesure à la résistance. ”

“ Les segments de la lèvre de l'homme, dont on pratique si fréquemment l'exérèse dans les services de chirurgie pour cause d'infiltration épithéliomateuse, possèdent, sur les bords, des parties saines qui sont des matériaux de choix. On les fixe à la liqueur de Bouin, qui est très pénétrante, et on en fait des coupes perpendiculaires à la surface cutanée. Ces coupes permettent d'étudier tout à la fois la structure de la peau, de la muqueuse labiale et de nombreux bulbes pileux.
Les phanères unguéales sont absolument impénétrables à la paraffine. ”

“ S'il est des cellules dont l'examen présente un réel intérêt à l'état vivant, ce sont les produits sexuels, spermatozoïde et œuf.
Les spermatozoïdes sont mis en liberté en délayant un fragment de testicule dans un milieu conservateur, sérum physiologique ou sérum de Frey. Il est préférable, pour éviter l'emploi assez incommode de la platine chauffante, de s'adresser à des animaux à sang froid, comme la salamandre ou la grenouille. ”

“ Un mode particulier de coloration vitale qu'il conviendrait mieux d'appeler, avec Arnold, coloration post-vitale, consiste à détacher des cellules vivantes de l'épithélium du pharynx de la grenouille, ou des lambeaux de membranes minces telles que le mésentère, prélevés sur le vivant, et à les observer aussitôt dans la solution colorante. ”

“ Par eux nous apprenons que l'image d'un point, vue au microscope, n'est pas un point. C'est une tache lumineuse de dimensions qui varient en sens inverse du diamètre du faisceau lumineux admis par le microscope. ”

“ Le bleu de méthylène médicinal n'ayant qu'une toxicité très faible est la matière colorante de choix pour ce mode de coloration vitale. On le mélange aux aliments dans une proportion qui varie avec le poids de l'animal. La ration journalière sera de 10 centigrammes par kilogramme d'animal et sera maintenue pendant huit jours au moins. Quel que soit le mode de pénétration de la matière colorante dans l'organisme, il importe de savoir que la coloration ne persiste pas sur les pièces prélevées, si on ne prend pas la précaution de les fixer immédiatement. ”

“ Les cellules cartilagineuses étant très altérables sous l'influence des procédés courants de fixation et d'inclusion, il y a un intérêt particulier à les observer à l'état vivant. Pour cela, on prélève à l'extrémité d'un fémur de grenouille une mince coupe de cartilage qu'on observe immédiatement dans son propre plasma, c'est-àdire sous une lamelle immédiatement lutée. ”

“ Il n'existe que deux procédés donnant une sécurité absolue pour la mesure des objets microscopiques : 1° Le premier, applicable au cas où l'on se sert constamment du même microscope, consiste à calculer une fois pour toutes, pour chaque objectif et pour une longueur de tube constante, la valeur en fractions de millimètre d'une division du micromètre oculaire, afin de n'avoir plus à se servir ultérieurement que du micromètre oculaire. ”

“ Le picrocarmin doit être filtré au moment de s'en servir. On le fait agir sur les coupes libres dans un verre de montre ou sur lame dans un tube de Borel. Il faut, en moyenne, un quart d'heure pour la coloration ; mais, chaque fois qu'on peut le faire, il est préférable d'en suivre les progrès sous le microscope. Les noyaux sont teints en rose vif, le protoplasma en jaune orangé, les fibres musculaires lisses ou striées en rouge orangé, les faisceaux connectifs en rose pâle et les fibres élastiques en jaune-citron. C'est avec la peau que les différenciations les plus nettes sont obtenues. ”

“ Achromatisme et aplanétisme. — Les différents pouvoirs que nous venons d'étudier supposent tout d'abord que l'objectif répond à deux conditions primordiales : l'achromatisme et l'aplanétisme, d'une manière suffisante; car, cela reste bien entendu, la correction parfaite des aberrations chromatique et de sphéricité est encore à l'état de rêve en matière -d'objectifs de microscope. ”

“ Il y a lieu de l'examiner à l'état vivant et, après fixation, sur les coupes.
Pour l'examen à l'état vivant, on racle le pharynx d'une grenouille avec une mince lanière de baleine, et on porte le produit du raclage sur une lame dans une goutte d'eau salée physiologique. Les mouvements imprimés par les cils à certains éléments de la préparation, notamment aux globules rouges, attirent l'attention et permettent de trouver la surface vibratile.
Les mouvements des cils, d'abord trop rapides pour être observés, ne tardent pas à se ralentir. ”

“ Une parcelle de gélatine glycérinée est déposée sur le milieu d'une lame. On l'y fait fondre sur la lampe à alcool et de préférence sur le couvercle d'un bain-maric. Quand la gélatine est en fusion, on y dépose les tissus à l'aide de l'aiguille à dissociation, et on couvre de la lamelle. Le tout se prend par refioidissement, en un bloc capable de supporter le transport.
Montage au baume du Canada. — Le montage au baume du Canada, pour s'effectuer commodément, doit se préparer dans un verre de montre. Les tissus dissociés, fixés et colorés, y sont passés il l'alcool absolu, puis au xylol. ”

“ La supériorité des systèmes à immersion sur les systèmes à sec ne se fait bien sentir qu'à grossissement égal. C'est là une donnée pratique de la plus haute importance. Plus on augmente le grosssissement, plus on perd le bénéfice de l'immersion : en général, on peut gagner la différence d'un numéro plus fort d'oculaire d'Huyghens à netteté égale ”

“ Cette coordination préalable entraîne en effet à prévoir l'outillage tranchant, burins et fraises, de profil adapté au travail à effectuer. C'est donc par cette préparation qu'il faut débuter dans l'exécution d'une pièce.
Dans de telles conditions, on sera sûr de pouvoir la poursuivre d'un bout à l'autre sans arrêt ou sans retard imprévus.
En un mot, par l'ordre et la méthode dans le travail, non seulement on évitera les surprises et les difficultés
qui rebutent, mais, au lieu d'échouer, on se fera un jeu de mener tout à bien. ”