Hématoxyline

“ L'HÉMATOXYLINE. Cet agent, tel qu'il est préparé suivant le procédé de Ranvier, colore mieux que le carmin tous les microbes ronds, mais n'a généralement pas d'action sur:les bacilles et sur. les autres bactéries. L'hématoxyline pure (sans alun) a été employée en solution concentrée, par Koch, pour colorer le flagellum des bactéries. Celui-ci ne se colore pas par les couleurs d'aniline, qui, au contraire, colorent le protoplasma des micro-organismes. ”

“ L' hématoxyline est une matière colorante douée d'une affinité toute particulière pour les parties épithéliales et les noyaux; c'est grâce à elle qu'on a pu bien étudier les phénomènes de karyokinèse.
On la prépare de plusieurs manières ; voici celle de M. RANVIER : On fait une première solution avec : nématoxyline 0 gr. ”

“ Il est sombre et un peu excavé : si on rapproche l'objectif, le centre devient clair et la périphérie s'obscurcit ; l'inverse a lieu si on l'éloigne. Il offre d'ailleurs un aspect qui dépend du mode de préparation ; il peut être suivant les cas homogène, réticulé, nucléolé ou dépourvu de nucléole. L'hématéine et l'hématoxyline le colorent vigoureusement, plus fortement que celui des mononucléaires et le fait détacher en foncé sur le fond plus clair du disque protoplasmique. ”

“ Citons : fuchsine ammoniacale et bleu d'aniline, dans laquelle le bleu d'aniline se superpose à la fuchsine sur le bois pour donner des tons violacés qui tranchent mal sur le bleu de la cellulose.
En outre, cette coloration n'est pas stable (Voir Triple coloration de Prenant) .
3. - Coloration des tissus animaux.
LAQUE FERRIQUE. - Ceprocédé utilise l'hématoxyline et l'alun de fer. La meilleure hématoxyline à l'état solide n'est pas la plus incolore. Il faut au contraire rechercher l'hématoxyline couleur brun clair, qui fournit des précipités moins pulvérulents. ”

“ L'hématoxyline au ferles colore alors vivement. Ils sont le plus souvent dirigés à peu près parallèlement à l'axe de la cellule, surtout sur les côtés du noyau et un peu au-dessous, quelquefois rares et très éloignés l'un de l'autre, quelquefois abondants, isolés ou groupés en traînées, d'où l'aspect strié de l'élément. Mais souvent aussi, on les voit, particulièrement vers la base, dirigés un peu en tous sens, ou concentriquement autour d'une tache claire qui n'est autre que le corpuscule paranucléaire. Ces filaments de la base sont fréquemment en virgule, très courts ”

“ On lave à l'eau et l'on porte les coupes dans une solution aqueuse d'hématoxyline pendant un laps de temps qui varie selon le résultat à obtenir, de une demi-heure à douze heures. Les coupes y prennent une teinte noirâtre. On lave à l'eau et l'on verse de nouveau sur la préparation de la solution ferrique. On voit alors la matière colorante se localiser sur le noyau ; mais le protoplasma prend une teinte bleue plus pâle et les centrosomes apparaissent comme de petits points colorés en noir bleuâtre. ”

“ Succédané de l'hématoxyline.
GIRRE, qui a expérimenté cette teinture, trouve qu'elle est inutile, parce qu'elle ne dilTère en rien de l'hématoxyline; il déclare qu'il n'emploiera plus désormais le « Myrtillus » que sous forme de compote de myrtilles.
151. Ribésine (FOL; Lehtb., p. 184) . —Extrait de gousses de cassis. Succédané de l'hématoxyline. ”

“ La capsule surrénale supporte péniblement, comme le rein, l'inclusion à la paraffine. Aussi l'inclusion devra-t-elle être rendue aussi courte que possible.
Les coupes débitées à 5 p. seront colorées au violet de gentiane ou par le procédé de l'hématoxyline ferrique. Comme colorant plasmatique, l'orange G aura le choix, parce qu'il se fixe avec plus d'énergie sur le protoplasma des cellules nerveuses et contribue ainsi à les faire reconnaître. ”

“ Les premiers stades du déve-
loppement peuvent être suivis sur l'œuf vivant, mais lorsque les contours des cellules cessent d'être visibles, on doit avoir recours aux réactifs. L'acide osmique employé à l'état de vapeur donne de bons résultats, mais le liquide picro-sulfurique (liqueur de Kleinenberg) vaut encore mieux. Lavage à l'alcool à 70° et 90°, puis coloration par l'hématoxyline. Déshydratation et coupes par la paraffine. ”

“ Les auteurs ont cherché à obtenir dans leurs préparations les figures caractéristiques de la cytodiérèse.
L'acide nitrique à 3 p. 100 conserve particulièrement bien les éléments des Sélaciens. De petits fragments de testicule sont placés pendant vingt-quatre heures dans la solution, puis dans l'alcool à 70°. Au bout d'un jour on colore en masse par le carmin boracique ou aluné, ou par l'hématoxyline. Pour obtenir une coloration intense, on laisse les pièces pendant deux jours dans les réactifs. On traite ensuite par l'alcool absolu, l'essence de térébenthine et la paraffine. ”

“ Il est insoluble dans l'eau pure, soluble dans l'eau additionnée d'alun.
Tout comme l'hématoxyline, le carmin ne peut agir sur les tissus qu'à l'aide d'un mordant; l'alun est le plus communément employé.
Le carmin est un excellent colorant des noyaux.
Son seul défaut est d'agir lentement, ce qui rend son emploi peu pratique lorsqu'on a de nombreuses coupes à colorer.
On emploie les solutions suivantes : Carmin aluné. — Ajouter à une solution aqueuse d'alun de potasse d'une concentration de 1 à 5 p. 100, une quantité de 0,5 à 1 p. 100 de
carmin en poudre. ”

“ On les enlève aussitôt qu'ils commencent à brunir; cependant, pour fixer des parties profondes, on peut prolonger la réaction pendant plusieurs heures. Il est bon de laver les pièces à l'eau avant de procéder à la coloration, mais ces lavages n'ont pas besoin d'être poussés aussi loin que pour les pièces fixées dans les solutions. Nous recommandons, comme colorants, le vert de méthyle pour les pièces destinées à. être étudiées dans un milieu aqueux ; puis, pour les préparations au baume, le carmin à l'alun, ie picro-carmin, ou l'hématoxyline préparée selon la formule que l'on préfère. ”

“ LIQUIDES A CELLULES (SANG, LYMPHE, CHYLE) . 125
L'hématine amorphe se prépare facilement en filtrant les globules après l'addition d'une quantité suffisante de sulfate de soude, on enlève la matière colorante par l'alcool chargé d'acide sulfurique. La solution brune devient rouge après neutralisation avec de l'ammoniaque et laisse déposer toute l'hématine. Par ces traitements, la matière colorante a très-probablement subi des modifications, elle n'est plus ce qu'elle était dans le globule, tout au moins, elle a passé de l'état soluble à l'état insoluble. ”

“ Le fait fondamental qui sépare l'hématolyse par les sérums de l'hématolyse précédente ou hydro-hématolyse pure, c'est qu'elle peut aboutir à une dissociation complète, à la mise en liberté des substances spécifiques. Mais pour cela, il faut une certaine température : 37° est la température optima, tandis que celle de 0° empêche nettement sa réalisation. Nous avons vu que l'hydro-hématolyse pure se fait à toute température, et résulte essentiellement de la pénétration du stroma protéique par les sels et del'imbibition aqueuse qu'ils provoquent. ”

“ Il résulte de tous ces faits que l'hématolyse par les sérums reconnaît, à notre avis, l'action de trois substances : 1° la sensibilisatrice ; 2° la toxine ; 3° l'alexine. Une hématie ne peut se détruire que si elle est sensibilisée, intoxiquée et alexinée.
La notion de l'intervention de la toxine hématique, que nous introduisons pour la première fois dans l'interprétation des phénomènes hématolytiques, nous semble primordiale.
La toxine hématique englobe toutes les substances décrites sous le nom d'ambocepteurs ou sensibilisatrices des hématolysines naturelles. ”

“ Nous avons vu que l'hémoglobine se combine avec l'O ou le CO, dans le corps ou en dehors de lui ; que, dans le corps, elle peut se décomposer et fournir soit de l'hématine qui en contient tout le fer, soit la substance exempte de fer, l'hématoïdine ou bilirubine ; que des transformations semblables peuvent être produites artificiellement : on obtient de l'hématine sous l'influence de réactifs relativement faibles, et de l'hématoporphyrine avec les acides forts. ”

“ D'une façon générale, on s'accorde à écrire, sous le nom d'hémolysine des substances hémolysantes, organiques, naturelles ou artificielles, jouissant des deux propriétés suivantes :
1° De n'agir qu'en présence de complément, c'est-àdire d'être inactivables par le chauffage à 56° et réactivables par l'addition de sérum frais complémentaire :
2° D'être spécifiques, c'est-à-dire d'exercer toujours leur action vis-à-vis de la même espèce de globules.
A l'opposé des hémolysines, se trouvent toutes les substances organiques ou non susceptibles d'exercer une action hémolysante. ”

“ On peut déterminer, pour chaque sel, la concentration maxima de la solution pour laquelle le pigment commence à quitter le stroma (1) (méthode d'Hamburger : dans le mélange soumis à la centrifugation, les hématies déposées sont surmontées d'une couche de liquide coloré en rouge par l'oxyhémoglobine libérée) , ou bien la concentration minima (2) de la solution, pour laquelle la totalité des hématies a abandonné le pigment au milieu ambiant (méthode de Mosso : les mélanges pour lesquels l'hématolyse est totale sont transparents ; ils sont troubles quand l'hématolyse est seulement partîelle) . ”

“ Si on ajoute, en effet, du chlorure de sodium à 10 °/oo dans une émulsion de sang qui vient de perdre son hémoglobine, l’hémoglobine est incapable de retourner dans l’hématie.
Les théories physiques expliquent bien l’hémolyse par l’eau distillée; elles sont moins séduisantes quand on essaye de leur demander la raison de l’hémolyse par les sérums. On admet alors que les substances hémolytiques agissent sur les parois cellulaires. ”

“ Le fer des globules est un de ses éléments constitutifs, et toute réaction qui le leur enlève les détruit en même temps : tel est l'hydrogène sulfuré. La coloration de l'hématosine est si vive, qu'il suffit d'une très-petite quantité, de quelques gouttes pour colorer une masse considérable de liquide en rouge plus ou moins foncé. Quelques faits autorisent à admettre que c'est à elle que l'oxygène et l'acide carbonique se combinent ”

“ En dehors de l'intoxication générale qu'elle détermine, cette toxine a une grande affinité non seulement pour les bactéries qui l'engendrent, mais pour les hématies sensibilisées et pour les leucocytes, et nous assistons ainsi à une action réciproque des toxines sur les différentes sortes de cellules : l'hématotoxine se fixe volontiers sur les bactéries sensibilisées et la toxine microbienne sur les hématies sensibilisées et les leucocytes. ”

“ Il se produit une accumulation de l'antitoxine dans le sérum, en quantité proportionnelle à l'usure de la toxine qui réalise l'hématolyse. Mais il arrive un moment où l'antitoxine solubilisée est tellement abondante dans le sérum que toute la toxine libérée se trouve aussitôt neutralisée. A vrai dire, la puissance antitoxique ne peut se manifester que lorsque les hématies très sensibilisées sont toutes détruites. Insuffisance de sensibilisation, accumulation de l'antitoxine, voilà ce qui arrête le processus destructeur. ”

“ La découverte de l'hémoglobine, sa combinaison avec l'oxygène (oxyhémoglobine) avec l'acide carbonique, avec l'oxyde de carbone, avec le protoxyde d'azote a singulièrement facilité l'intelligence de l'acte respiratoire, de l'asphyxie et de certains empoisonnements.
La production artificielle de cristaux d'hémine avait déjà été d'un grand secours à la médecine légale. L'emploi de l'analyse spectrale donne encore plus de précision et de simplicité à la recherche du sang. ”

“ Hématotoxine ou protéase hématique. — n y a le plus souvent leucopénie ou hypoleucocytose locale, au moment où se produit une diffusion hémoglobinique abondante. Ce fait cadre avec la leucopénie ou la fragilité leucocytaire que nous avons signalée, au moment où se produisent des hématolyses massives, dans le système circulatoire. Ce n'est pas l'hémoglobine qui est la substance nocive. Nous savons que l'hématolyse in vivo met en liberté, non seulement l'hémoglobine mais encore la toxine hématique. Cette substance seule explique tout un ensemble de phénomènes ressortissant à la toxicité. ”

“ La diffusion hémoglobinique est souvent très rapide. C'est ainsi que le sérum de chien mis en contact avec des hématies de lapin, peut faire diffuser l'hémoglobine eh deux, trois ou quatre minutes, à la température ordinaire. Dansune diffusion aussi rapide, il ne semble point qu'on ait affaire à une action purement fermentative. La pénétration du ferment doit être en tout cas facilitée par une hydratation de l'hématie. En effet, tous les sérums contiennent du chlorure de sodium : la substance protéique peut donc être imprégnée par ce sel dans l'hématolyse par les sérums. ”

“ Aussi, l'action du sérum, avec son hématotoxine et sa lipase, est extrêmement rapide, surtout si l'on emploie un sérum sensibilisateur. Si, chez un animal, des microbes se détruisent et abandonnent dans le sang une certaine dose de sensibilisatrice, qu'on injecte d'autres microbes de même espèce ou que le microbe reprenne sa prolifération dans le sang,il se trouvera au contact d'une telle quantité de sensibilisatrice, permettant non seulement à sa toxine propre mais encore à l'hémato-
toxine du sérum sanguin de le pénétrer, que la bactériolyse sera très rapide. ”

“ On voit que, par hémolyse, on entend, non pas la destruction de tous les éléments figurés du sang, c'est-à-dire des globules rouges et des globules blancs, mais seulement des premiers de ces éléments.
Les solutions ou les substances qui produisent l'hémolyse sont des solutions ou des substances hémolysantes : elles sont douées d'un pouvoir hémolysant.
Mais une distinction doit être faite à leur sujet.
Pour les unes, le pouvoir hémolysant tient à leur nature même : il en est ainsi, par exemple, de l'eau pure, des acides, etc. ”