Raymond Gèzes

“ « Le bacille typhique, quels que soient la période de la maladie et le pouvoir agglutinant sur le bacille d’Eberth, n’agglutine ordinairement pas le bacille d’Esserich. Lorsque le sérum des typhiques agglutine le bacille Goli, c’est à un degré très faible, qui n’a pas de rapport avec l’intensité et les variations du pouvoir agglutinant de ce même sérum sur le bacille d’Eberth et paraît sans grande signification, puisque même des sérums non typhiques peuvent donner une agglutination analogue et même plus accusée ». ”

“ S'il en est un qui peut-être doive être retenu comme susceptible d’aider fructueusement les recherches bactériologiques, nous serons portés à accorder une certaine valeur à la vaccination préventive du bouillon arsenical de MM. Brouardel et Thoinot par rensemencement d’un bacille d’Eberth authentique. Et si notre opinion est telle, quoiqu’on contradiction avec les expériences de ces derniers auteurs, c’est que le bouillon à l’acide arsenieux a toujours, du moins pour nous, été fertile pour le bacille typhique. ”

“ On peut objecter que le bacille d’Eberth sera bien plutôt celui qui ne poussera pas ou poussera très difficilement sur le bouillon sérum Eberth. Et nous répondrons encore que là même le phénomène d’agglutination intervenant, tout bacille qui poussera pourra très bien être un Eberth, par la seule raison que certains Eberth, d’ailleurs très authentiques, sont à peine agglutinables et même quelquefois ne peuvent être agglutinables qu’après passage en péritoine de cobaye ou ensemencements nombreux ayant pour but d’exalter leurs propriétés. ”

“ Nous ne pensons nullement avoir fait une étude complète de la biologie comparée du Bacille d’Eberth-Oaffky et du Bacille d’Escherich. Le champ d’expérience, déjà bien défriché cependant, eut encore été trop vaste pour nos faibles forces. Nous nous sommes seulement borné à envisager la valeur comparative et absolue de quelques méthodes de diagnostic différentiel, trop heureux encore, si les quelques heures que nous y avons employées nous permettent d’obtenir un résultat appréciable. ”

“ En présence de sérum d’animaux immunisés, il y a beaucoup moins de différence entre l’ensemble des races dites bacilles d’Ëberth, d’une part, et les races de Coli, d’autre part, qu’il n’y en a entre les divers échantillons de bacille d’Eberth comparés les uns aux autres, et surtout entre les diverses races de Coli ; en d’autres termes, par la réaction agglutinative, le bacille d’Eberth se distingue moins du bacille Coli que les diverses variétés de ce dernier ne se distinguent entre elles. ”

“ A. — CULTURE DANS LE LAIT
Si l'on ensemence du B. Coli dans du lait stérilisé, on voit, ordinairement, au bout de vingt-quatre à quarante-huit heures d’étuve, que le lait est coagulé. Le lactose, étant attaqué par le bacille Coli, met en liberté des acides qui déterminent en peu de temps la coagulation de la caséine. Dans les tubes, on voit à la partie inférieure, un coagulum, au-dessus duquel surnage un liquide jaunâtre, transparent, à réaction souvent acide. ”

“ Il n’en est pas de même pour le bacille d’Ebertb. dont le caractère spécifique est reconnu par la majorité des bactériologistes. L’agglutination d’un bacille à caractères éberthiens, obtenue par un sérum antityphique est, de tous les procédés de différenciation, le seul qui puisse, avec une réaction positive à un titre élevé, nous permettre de croire sûrement à la nature éberthienne de ce bacille. ”

“ P Actuellement, après avoir passé par ces alternatives de faveur et de défaveur, de succès et d’insuccès, la recherche bactérioscopique du bacille d’Eberth dans les eaux de boisson prend un regain de vigueur. Les analyses, plus fréquentes et surtout plus minutieuses, deviennent plus dignes de créance. Et cette valeur qui leur manquait, il n’y a guère encore que quelques années, leur vient justement des nombreux travaux nés de cette longue discussion à propos de l’identité du Bacille typhique et du Bacillus Goli Gommunis. ”

“ La production de l’indol semble également être entravée par une culture en couche mince, souvent aérée par agitation au contact de l’air, et aussi par la présence en excès de chlorure de sodium. Si, par contre, la matière azotée contenue dans le milieu de culture, est un sel ammoniacal, de l’asparagine, de la levure, il n’y a pas non plus formation d’indol. Le moyen le plus sûr d’en obtenir, d’après Péré, serait de cultiver le bacille Goli à 37°, dans une solution de peptone pancréatique pure, additionnée seulement d’un peu de phosphate de potasse. ”

“ En attendant le jour où un tel milieu existera, s’il existe jamais, s’il est une technique qu’il soit préférable de suivre, irons sommes porté à croire, par les quelques résultats que nous avons obtenus, que la culture en bouillon phéniqué à 1 p. 1000, et à 44°5, avec réensemencements fréquents, au moins toutes les six heures, peut permettre d’arriver à isoler à peu près les bacilles d’Eberth et d’Escherich. ”

“ Malheureusement, ce caractère n’est pas aussi constant qu’on aurait voulu le croire, et tels échantillons du B. Coli semblent être du Bacille d’Eberth et inversement.
Sur pomme de terre, un Ebertli authentique, type, n’est visible à l’état de culture qu’au bout d’environ deux jours d’étuve; et ce n’est même qu’en examinant à jour frisant la surface ensemencée, que l’on aperçoit une trainée luisante, humide et vernissée, rappelant les traces du passage d’une limace ou d’un escargot; la culture est en « bave d’escargot ». ”

“ MM. Pouchet et Bonjean se servent alors pour reconnaître le bacille Goli, de trois ordres de caractères :
a) Les caractères des cultures sur lait, gélatine, pomme de terre, gélose;
b) La séro-réaction ;
c) L’expérimentation physiologique [dont la priorité revient à M. G. Roux (143) ] .
De l'avis même des auteurs du procédé, il est bon d’attendre que les cultures de seconde génération soient âgées de huit jours au moins, avant d’entreprendre les expériences d’isolement et de différenciation. ”

“ Et d'abord, en examinant le cas des procédés de culture en milieu phéniqué, et de culture en tube de Gambier, nous pourrons de suite dire que cette combinaison ne peut donner de bons résultats. On sait en effet, que la présence de l’acide phéniqué dans un
milieu de culture a, entre autres conséquences, celle de diminuer la mobilité des bacilles, et que le bacille d’Eberth est encore bien plus sensible à son action paralysante que le bacille Goli. ”

“ L’acide phénique n’est donc pas sans action sur la vitalité du bacille d’Eberth, et si cet agent est avantageux pour éliminer les bactéries inoffensives, il est dans une certaine mesure nuisible au succès même de la méthode, en paralysant la vigueur et la vitalité du bacille typhique. ”

“ Il existe entre ces types de bactéries certaines différences importantes au point de vue de leurs propriétés et de leur manière d’agir dans l'organisme. La réaction agglutinante du sérum-Eberth vis-à-vis du bacille typhique et seulement vis-à-vis de lui, ainsi que le défaut d’agglutination du bacille d’Eberth par le sérum-coli sont deux faits d’ordre assez capital pour établir une ligne de démarcation nette entre ces deux bacilles. ”

“ La culture du bacille d’Eberth en milieu solide vacciné, tout comme d’ailleurs, celle du bacille Goli, offrant en plus de leur faible valeur diagnostique, l’inconvénient de ne donner que des colonies assez faiblement appréciables, on a songé à appliquer le principe de la vaccination des milieux, à des liquides nutritifs. ”

“ En dehors des antiseptiques, on s’est aussi préoccupé de trouver d’autres agents dysgénésiques capables d’entraver aussi complètement que possible la pullulation des microbes vulgaires, tandis que les bacilles d’Eberth et Coli, pourraient encore avec facilité, végéter et croître en présence de ces mêmes agents. ”

“ Nous avons traité des eaux suspectes naturellement, par la pullulation à l’étuve et la filtration sur papier. Mais ce mode opératoire réclame d’abord vingt-quatre heures pour arriver à la pullulation demandée, et exige une assez grande quantité de sérum antityphique. Si pour 10 centicubes d’eau, il faut 3 gouttes de sérum, un calcul très simple montre qu’il faut 300 gouttes pour un litre ou plus simplement, à 30 gouttes au centicube, 10 centimètres cubes de sérum. Et de plus, il semble que d’autres microbes puissent être entraînés mécaniquement par l’agglutination. ”

“ Dès vingt-quatre heures de culture à l’étuve soit à37°, soit à 44° 5, le bouillon arsenical préparé d’après les indications de ces auteurs, laisse nettement entrevoir un trouble. Il est vrai cependant que les cultures de coli sont plus abondants que les cultures d’Eberth; mais toutefois nous ne considérons pas dette simple différence d’intensité comme un caractère suffisamment précis et reconnaissable, pour permettre de qualifier d’Eberth ou de Coli un bacille, suivant qu'il pousse plus ou moins dans un tel milieu. ”

“ Dans un tel milieu, le bacille coli donne une coloration rouge lie de vin, avec dégagement de petites bulles gazeuses si on a soin de laisser le liquide au repos, tandis que le bacille typhique ne produit pas de gaz et ne fait pas virer la teinture de tournesol. ”

“ Il semble dans ces cas qu’il y ait immunisation du milieu de culture.
A. — GÉLATINE OU GÉLOSE VACCINÉE.
Dans une communication faite en 1891 k la Société de Biologie, M. Wurtz (45) trouva dans les faits exposés plus haut, un nouveau caractère différentiel entre le bacille d’Eberth et B. Goli communis. En effet, si on ensemence un échantillon de Goli sur de la gélose où a déjà poussé un Eberth, le Goli s’y développe de façon très appréciable quoique moins bien que sur un milieu neuf. ”

“ Dès lors, deux choses étaient possibles : ou bien, vacciner le bouillon peptone ordinaire d’usage courant, ou bien vacciner des bouillons spéciaux. D’autre part ce bouillon pouvait être vacciné, soit par la pullulation préalable des bacilles vaccinants, soit, par l’addition d’une substance vaccinante. M. U. Biffi (210) , proposa ainsi de rendre bactéricide pour le Goli communis, du bouillon ordinaire, par l’addition de sérum de lapin immunisé contre ce microbe. M. H. Emery (192) proposa lui, de vacciner par culture un
bouillon spécial. ”

“ Voici en effet quelles en ont été les conclusions :
1° Le bacille d’Eberth traverse toujouis les parois des bougies Cbamberland (marque F) , sa vitesse est d’ailleurs variable de 2 à 7 jours.
2° Le bacille Coli communis traverse souvent (6 fois sur 8 expériences) , les mêmes bougies et presque dans le même temps.
3° En mélange, le B. d’Eberth. et le B. Coli traversent souvent (9 fois sur 12) , les parois des bougies filtrantes. La culture extérieure n’est jamais exempte de colibacilles. ”

“ On fera passer le bacille d’ensemencements en ensemencements successifs, ou d’inoculation en inoculations successives, jusqu’au moment où on trouvera un bacille agglutinable par un sérum agglutinant.
Ces faits ne sont pas seuls dans la bactériologie. On connaît un certain nombre de microbes, qui pour posséder à un taux quelquefois même assez faible, la possibilité de s’agglutiner, doivent au préalable passer soit par l'inoculation sous-cutanée ou intra- péritonéale, soit par toute une série d’ensemencements successifs. ”

“ Parietti (36) avait constaté que le développement du bacille d’Eberth dans une culture quelconque dépend de la quantité de semence introduite et de la quantité d’antiseptique, ici encore l’acide phéniqué, que l’on ajoutait au milieu de culture pour le rendre électif. En conséquence, un même bouillon pouvait devenir fertile, suivant que les germes ensemencés étaient nombreux ou rares et, d’autre part, pour une même quantité de semence, telle culture additionnée de 5 p. 1000 d’acide phéniqué ne poussait pas, alors qu’avec 3 p. ”

“ Les germes étant retenus dans le vase et sur les parois de la bougie, on fait pénétrer par un des tubes de l'eau peptone stérile.
La culture et le barbottage de l’air recommencent alors dans un bouillon frais. Le liquide utilisé doit être renouvelé toutes les douze heures, une ou deux fois. Au bout de ce temps, le bocal renferme une culture extrêmement riche en microbes, qu’il s’agira d’identifier. ”

“ On décante, puis on dissout ce précipité dans un excès (quelques gouttes) d’hyposulfite de soude : ce sera là la solution qui servira aux ensemencements des boîtes de Pétri ou autres milieux solides.
Nous avons tenu à employer cette méthode, pour la modification qu’elle apportait à l’emploi de la centrifugation. Dans quatre cas d’analyse d’eau, tandis que la présence du bacille coli nous était dévoilée par d’autres procédés en 48 heures, nous n’avons jamais eu de culture où nous ayons pu mettre en évidence ce même bacille coli. ”

“ Quand la filtration est obtenue on vérifie l’acidité. Pour cela, on prélève à l’aide d’une pipette graduée, 10 centicubes de gélatine que l’on dépose dans un vase de Bohême, contenant environ 100 centicubes d’eau distillée exactement neutre, et IV à V gouttes de phta-léine du phénol. On laisse alors tomber goutte à goutte, au moyen d’une pipette de 1 centicube graduée en centièmes, la solution demi-normale de soude. La coloration rouge doit apparaître sitôt que 0,2 centicubes de la solution sodique ont été ajoutés aux 10 centicubes de gélatine. ”

“ « On recueille les colonies qui se sont développées « au bout de deux heures, et on les ensemence dans « un tube d’eau peptone contenant un peu de sérum « agglutinant. Quelques heures plus tard, le bouillon « est clair et les colonies typhiques développées sont « rassemblées au fond du tube par le fait de l’aggluti-« nation. Tout tube troublé uniformément ne contient « pas le bacille typhique, ou du moins ne le contient « pas à l’état de culture pure ». ”