Pierre Miquel

“ Mais ce que je pourrais dire sur l'extrême variété des ferments ammoniacaux n'ajouterait pas un nouvel intérêt au fait principal que je m'applique depuis longtemps à démontrer ; à savoir : que dans la nature les microorganismes qui décomposent l'urée appartiennent aux diverses tribus des bactéries ; que la fermentation ammoniacale n'a pas pour agent un seul microbe spécifique, comme on l'avait admis il y a une vingtaine d'années ; que ceux qui la déterminent sont fort nombreux, et possèdent des pouvoirs fermentaires d'une énergie très variable. ”

“ Mais, si on augmente la nutrivité du milieu, la fermentation devient très rapide et, comme une véritable curiosité à montrer dans les laboratoires de microbiologie, je citerai l'exemple d'une fermentation où la destruction de 100grammes d'urée a pu être obtenue en 48 heures, y compris la durée d'incubation réclamée pour le rajeunissement de l'espèce. Il serait trop long et d'un intérêt médiocre de s'étendre sur ces exemples particuliers ; je dois surtout m'appliquer à étudier ceux qui se rattachent aux faits habituels et vulgaires de la biogénèse du carbonate d'ammoniaque. ”

“ Dans les expériences où le bacille urophage résistait, il était contaminé par le bacille dépourvu de toute action sur l'urée.
Je ne connais rien de plus humiliant pour l'amour-propre que d'être en butte à des difficultés infimes, d'apparence, qui renaissent sans cesse après qu'on croit les avoir vaincues et persistent avec une ténacité qui n'a d'égale que la ténacité que l'on met à les vaincre. ”

“ Plusieurs hypothèses vraisemblables peuvent être invoquées à cet égard : d'un côté, l'urase s'épuise et agit à dose moins massive sur la quantité d'urée, qui devient elle-même de plus en plus faible ; et, d'autre part, le carbonate d'ammoniaque qui s'accumule dans la liqueur devient toxique pour le ferment soluble ; en outre, comme dans les fermentations provoquées par les microbes urophages, le mélange des solutions d'urée et de diastase, d'abord limpide, se trouble dès que la quantité d'ammoniaque formée dans le mélange atteint une alcalinité correspondant à 8 à 10 grammes d'urée décomposée. ”

“ A considérer le poids total de ce mycélium rabougri de l'urine humaine, on est étonné de l'action relativement faible qu'a produite le mycélium très prospère qui s'est développé abondamment dans le milieu sucré, et qui, cependant, n'a décomposé, à peine, que 1 ou 2 grammes de plus d'urée.
La végétation luxuriante d'une moisissure urophage ne signifie aucunement sécrétion abondante d'urase, car cette substance semble se produire dans des conditions qui ne sont pas toujours celles de la vie normale du végétal. ”

“ Prenons un malade atteint d'ammoniurie, et admettons que V Urobacillus Pasteurii soit solidement établi dans sa vessie, non seulement cet organisme transformera sans trêve l'urée de l'urine, en carbonate d'ammoniaque, mais il produira un excès de ferment soluble qui garantira la fermentation ammoniacale pendant de longs jours. Les injections d'eau phéniquée seront impuissantes à conjurer le mal, car elles échouent autant contre le microbe que contre
le ferment soluble. ”

“ Chaque jour, en un mot, voit augmenter la déchéance d'activité du ferment soluble de l'urée, et, comme effet singulier de cette déchéance et de son inaltérabilité acquise, les substances qui ont la propriété d'exalter l'action de l'urase, se montrent de jour en jour moins efficaces. ”

“ Si, en effet, on recommence la même expérience avec un
bouillon diastasique datant de 6 môis, on observe que la saccharose et la glycérine, loin de faciliter l'action de l'urase, l'entravent, je ne dirai pas beaucoup mais d'une façon très appréciable.
L'urase vieille n'a plus besoin de protection, elle a acquis les qualités d'inaltérabilité qui lui permettent de braver : la température de 500 prolongée pendant de longues heures, l'oxydation par l'oxygène de l'air atmosphérique et la destruction par les antiseptiques, qui s'exerçaient si aisément sur elle dans sa jeunesse. ”

“ Considérations sur la nutrition du microbe. —De même que les bactéries vulgaires, l'espèce qui nous occupe forme sa cellule et son protoplasme aux dépens des aliments minéraux, albuminoïdes ou azotés, répandus dans les bouillons ; il brûle de l'oxygène et dégage de l'acide carbonique; il secrète en outre une substance diastasique à laquelle est dévolue la faculté d'hydrater l'urée. Mais ce n'est pas en ce moment le point qui doit fixer notre attention. Voyons quelle est l'action directe de l' Urobacillus Pasteurii sur la substance fermentescible. ”

“ Il semble, en effet, probable que les produits sécrétés par les levures pendant leur vie adulte ne sont pas étrangers à la décomposition du sucre en acide carbonique et alcool ; cependant il reste aux partisans de cette théorie à produire des faits établissant l'existence de ce ferment soluble. Les expériences sur l'urase nous démontreront, tout à l'heure, que l'isolement d'une diastase est souvent entouré de très grandes difficultés, et qu'en cette matière les expériences négatives n'ont souvent pas d'autre portée que de démontrer la difficulté et la délicatesse du problème à résoudre. ”

“ Il arrive parfois, quand l'espèce qui contamine le ferment est un bacille saprogène semblable à celui dont j'ai parlé plus haut, que la fermentation n'a jamais lieu, soit parce que le développement du microbe urophage ne peut s'effectuer librement, soit encore parce que la diastase qu'il secrète est détruite au fur et à mesure de sa production. ”

“ Avec les urines titrant 50 grammes d'urée, l'espèce est encore vivante au bout de 6 mois. Dans les urines à 100 grammes d'urée complètement fermentées, maintenues à 30° et conservées à l'abri de l'air, le liquide agité prélevé à la dose de quelques gouttes, se montre même après 80 et 90 jours d'attente, capable de déterminer la fermentation. Je ne parlerai pas de la fécondité des germes contenus dans les bouillons et les gélatines simplement peptonisées ; ils sont aussi vivaces au bout de deux ans qu'au moment de leur formation. ”

“ Peut-on songer un instant à aller brûler la muqueuse avec des solutions concentrées de substances caustiques, pour détruire les germes très résistants de l'urobacille ? Ce serait une étrange pratique : on commencera par arrêter la fermentation, et à cet effet, je préconise les lavages de sublimé à 1 : 100.000, qui n'ont aucune action sur l'urobacille, mais qui s'attaquent directement à l'urase et la détruisent. ”

“ On objectera peut-être que la détermination du caractère que je considère comme fondamental : l'énergie fermentaire, n'offre pas toute la simplicité pratique désirable. Elle exige, en effet, l'isolement du ferment figuré à l'état de pureté absolue, son ensemencement dans des urines artificielles spécialement préparées, enfin des dosages d'urée qu'on peut habituellement transformer en simples dosages alcalimétriques, opérations auxquelles, cependant, il faut être préparé et qui réclament un temps plus ou moins long. ”

“ Je ne partage pas cette opinion, je crois beaucoup plus probable que l'eau altère la nature même de la sécrétion, comme la chaleur altère l'albumine, la caséine, etc., ou dilue, ce qui au fond revient au même, les substances protectrices qui accompagnent les diastases dans les cultures. Nous voyons, en effet, que lorsque la diastase a vieilli elle se montre beaucoup moins sensible à la dilution par l'eau que quand elle est récemment sécrétée, et cette plus grande résistance, qu'elle acquiert par le temps, est manifeste quels que soient les agents physiques ou chimiques auxquels on la soumette. ”

“ Elles se nuisent à elles-mêmes par l'abondante production d'urase à laquelle elles donnent rapidement naissance, et par la production de carbonate d'ammoniaque qui en est la conséquence. Aussi est-il juste de dire que les milieux fortement chargés de carbamide sont les plus impropres à l'accroissement des ferments actifs de l'urée, ou pour mieux exprimer ma pensée, à leur multiplication cellulaire. ”

“ Dans les urines animales, ce trouble est beaucoup plus intense, et s'accompagne d'un précipité assez volumineux formé d'urates d'ammoniaque et de phosphate ammoniaco-magnésien.
Les urines normales ne donnent pas après la fermentation un excès sensible d'urase, ce qui tient au peu de nutritivité de ces liquides pour les espèces bactériennes en général; on n'ignore pas que j'ai établi depuis longtemps, que l'altérabilité des urines est environ douze fois moindre que celle du bouillon de bœuf (1) . ”

“ Ces préliminaires connus, je puis maintenant aborder la description des schizomycètes ferments de l'urée; je commencerai par étudier celui qui me paraît le plus remarquable, l'Urobacillus Pasteurii, que je dédie au savant français qui a le premier démontré que la fermentation
ammoniacale était due à la multiplication des cellules vivantes, et à qui la microbiologie est redevable d'un si grand nombre d'immortelles découvertes. ”

“ Les cultures successives dans les urines de la plupart des ferments de l'urée loin d'exalter leurs facultés physiologiques finissent au contraire par les atténuer à tel point que l'espèce abâtardie devient de plus en plus impropre à produire une bonne fermentation. Les cultures en générations successives, appliquées à un grand nombre d'espèces urophages, conduisent le plus souvent à l'obtention de ferments figurés dont le rajeunissement devient très pénible, quelquefois impossible. ”

“ En somme, nous retiendrons des expériences qui viennent d'être rapportées : que le ferment soluble de l'urée agit avec une énergie d'autant plus grande qu'il est en masse plus considérable, autrement dit qu'on étudie son action au début d'une fermentation ; que la température la plus favorable à cette fermentation est voisine de 50° ; que si cette température favorise à un degré moindre le début de l'hydratation que des températures supérieures situées au-delà de 50°, elle se montre, néanmoins, la plus favorable au déploiement d'énergie du ferment soluble ”

“ Un bacille n'est pas plutôt découvert, après de laborieuses années de recherches, que les élèves les moins érudits le retrouvent en abondance dans les éléments qui nous entourent : ici, c'est l'air qui charrie en grand nombre le bacille de la tuberculose découvert par le Dr Koch, là, les cours d'eau abondent en bacilles d'Eberth, et enfin il est des élèves et même des médecins qui sont si sûrs d'euxmêmes qu'un simple aspect microscopique ou cultural suffit pour amener dans leur esprit la certitude d'un bon diagnostic. ”

“ Dans un vase d'une forme voisine des matras distributeurs de M. Pasteur, mais à capuchon rôdé sur la tubulure centrale laissée verticale, et pourvu d'une longue pointe effilée mobile sur la tubulure latérale, j'introduis 250 cmc. d'urine normale ou artificielle qu'on stérilise à 110°. Ce vase à moitié plein, une fois refroidi, on l'ensemence avec quelques gouttes d'une culture féconde, on replace le capuchon, et immédiatement après on procède au dosage de la quantité d'urée, c'est le point de repère qui donne la richesse en urée de la liqueur avant le développement et l'action du ferment. ”

“ Malheureusement pour la justification de cette hypothèse, il faudrait pour s'assurer de la mort réelle d'une espèce, employer un autre moyen que sa culture dans les milieux qu'elle affectionne le plus ; jusqu'à ce que ce moyen soit trouvé, je
supposerai, dans le cas qui nous occupe, que c'est le
carbonate d'ammoniaque qui a tué le microbe, et que la décomposition de l'urée qui a suivi sa mort est due au ferment soluble qu'il avait sécrété en excès. ”

“ Le même bacille, cultivé à l'état de pureté, peut produire, en moins de quarante-huit heures, la fermentation complète d'un volume quelconque d'urine. Cependant, quand le microbe est gêné dans son développement par la présence d'un bactérien étranger, son action sur l'urée peut être beaucoup plus lente. Le phénomène d'hydratation de la carbamide, habituellement rapide, s'éternise et se complète difficilement.. ”

“ Elle ne donne pas de spores, et un excès de carbonate d'ammonium la tue avant qu'elle ait pu accomplir tout l'acte fermentaire dont elle paraît capable.
L'Urobacillus Schutzenbergii ne se trouve pas dans l'air -atmosphérique; le plus souvent, il vit et se multiplie dans les eaux de rivières, les eaux de quelques puits, la vase des ruisseaux et dans l'eau d'égout.
Toutes les fois qu'on le recherche avec des milieux nutritifs chargés de plus de 7 à 8 grammes d'urée, son isolement est une opération bactériologique non seulement difficile, mais encore impossible à effectuer. ”

“ La statistique va nous montrer que les espèces urophages sont assez fréquentes pour déterminer en tout lieu la destruction de l'urée sécrétée par les espèces animales ou résultant de la décomposition des substances albuminoïdes, et transmettre les éléments de cette décomposition aux agents de la nitrification auxquels est dévolu le rôle de présenter aux plantes l'azote sous une forme aisément assimilable.
Les êtres infiniment petits que nous venons d'étudier ont donc dans la nature un rôle des plus utiles et des plus importants ”

“ Urosarcina Hansenii, sive Urosarcina ex
Les sarcines sont des végétations microscopiques très répandues dans l'air et dans les eaux ; les unes sont incolores ou grisâtres, les autres rouges, jaunes, brunes, etc.; on ne doit pas les confondre avec les microcoques dont les cellules sont associées 4 à 4 sur un même plan. La véritable sarcine dérive d'une cellule, qui se divise suivant trois plans perpendiculaires entre eux. Ce triple cloisonnement fournit 8 cellules qui, à leur tour, en donnent 64, etc. ”

“ Pour des causes sur lesquelles j'ai déjà plusieurs fois insisté, la colonie de l'espèce urophage qui nous occupe s'arrête bientôt dans son accroissement; les bactéries qui la composent fortement touchées par le carbonate d'ammoniaque cessent de se multiplier à l'état de bâtonnets adultes et finissent même plus tard par être tuées par l'excès d'alcalinité dont ils sont la cause première.
L'ensemencement par piqûres de la gélatine nutritive chargée de 20 grammes d'urée par litre mérite moins d'attirer notre attention, l'urobacille y détermine une traînée blanche dès le lendemain ”

“ Anaerobiose. — UUrobacillus Pasteurii ne se développe pas à l'abri de l'oxygène de l'air ; cependant l'extraction complète des dernières traces de cet élément par le secours du vide, présente de si grandes difficultés, que les fermentations tentées dans les vases vidés à la température ordinaire avec la pompe à mercure, sont souvent le siège d'une légère altération qui s'accuse par la disparition de quelques grammes d'urée ; à l'œil, le liquide n'a pourtant pas perdu de sa limpidité d'une façon appréciable. ”

“ Il est heureux pour l'expérimentateur que la biogénèse du carbonate d'ammoniaque s'accomplisse généralement sur des quantités relativement élevées d'urée ; car il n'existe pas, à vrai dire, de procédés précis pour le dosage de très faibles quantités de cette substance, tenue en solution dans les liquides nutritifs en voie d'altération. ”

“ Je ne saurais établir avec les documents que j'ai entre les mains, si MM. Pasteur et Van Tieghem ont donné ultérieurement le nom de Micrococcus ureas à l'espèce qu'ils ont habituellement désignée par les termes de torule ammoniacale ou de petite torulacée ; ce que je puis affirmer, c'est qu'ils ne se sont pas contentés d'admettre que cette plantule microscopique était un agent capable d'hydrater l'urée ; ils ont commencé, tout d'abord, par le démontrer. ”

“ L'Urococcus qui nous occupe est donc un ferment actif, mais il faut reconnaître que la rapidité de son action ne saurait être comparée à celle de quelques bacilles urophages ; quoi qu'il en soit, notons l'hydratation de 0 gr. 23 d'urée par litre et par heure, et nous pourrons apprécier qu'il occupe une bonne place parmi les micrococcus ferments de la carbamide.
L'énergie fermentaire de cette espèce est de même digne d'attirer l'attention, car on rencontre rarement des microcoques qui puissent pousser aussi loin l'hydratation de l'urée. ”

“ Son action sur l'urée est remarquablement lente; en 40 jours il ne peut terminer la fermentation de l'urine artificielle renfermant 20 grammes d'urée; son pouvoir fermentaire est donc inférieur à celui qui correspondrait à l'hydratation de 0 gr. 50 d'urée par jour et par litre.
La gélatine peptonisée n'est pas visiblement liquéfiée par ce coccus, qui, au lieu d'y former, comme beaucoup d'espèces, des plaques saillantes et convexes, en fournit qui
s'affaissent progressivement en y creusant, à la longue, une sorte de puits qui peut acquérir 4 à 5 millimètres de profondeur. ”

“ J'ai pu effectivement constater .que le poids du mycélium est parfois plus faible après qu'avant la fermentation (1) . Il faut si peu d'urase. pour détruire beaucoup d'urée qu'un simple changement, ou peut-être une perversion dans la nature des sécrétions, me semble devoir suffire sans qu'il y ait formation de nouvelles cellules.
Avec un petit flocon de mycélium d'une mucédinée, ferment actif, immergée dans l'urine artificielle ordinaire, et arrêtée, du moins en apparence, dans sa croissance, j'ai pu transformer jusqu'à 50 grammes d'urée en carbonate d'ammonium. ”

“ L'urase est peut-être une substance alimentaire pour les bactéries, mais on comprendra, je crois, assez difficilement que dans un bouillon chargé d'urée il soit possible à une bactérie étrangère de tourner autour des cellules ferments pour s'emparer complètement d'une substance très active, dont l'action sur la carbamide est instantanée à l'état naissant. ”

“ Préparation du ferment soluble de l'urée
L'obtention d'un corps dont on ne soupçonne pas à l'avance les propriétés physiques et chimiques reste toujours entourée de grandes difficultés, par la raison que les manipulations auxquelles on se livre pour le préparer sont, pour ainsi dire, aveugles, et à ce titre elles peuvent nuire au rendement du corps nouveau dont on veut obtenir de notables quantités, et quelquefois, on peut l'affirmer également, ces manipulations sont fatales pour le corps lui-même, le détruisent au lieu de le séparer des milieux où il se trouve mélangé. ”

“ Ensemençons le bouillon avec l' Urobacillus Pasteurii, plaçons cet appareil à 30°, température qui paraît-être la plus favorable au développement de l'espèce ; puis, quand le bacille aura troublé le bouillon, portons le système dans une nouvelle étuve chauffée vers 55°. A ce degré de chaleur, l'urobacille adulte meurt; il ne peut dans aucun cas se développer, tandis que le ferment soluble qu'il sécrète agit, au contraire, sur l'urée avec beaucoup d'énergie ; cela connu, mélangeons à 55° les liquides des deux branches ; en moins de deux heures de temps la fermentation sera complète. ”

“ Piquée sur les milieux demi-solides chargés d'urée, la culture belle, quoiqu'un peu maigre, s'entoure rapidement de cristaux, et plus tard, si le milieu choisi est la gélatine, la masse se ramollit et se transforme en un liquide sirupeux. ”

“ Le bouillon de peptone est légèrement plus sensible à l'action des bactéries que le bouillon fabriqué dans les ménages, aussi quand on veut obtenir de l'urase dans les urines stérilisées par la chaleur, il est indispensable d'augmenter leur nutritivité, en les additionnant de peptone, ce qui du reste favorise l'éclosion de l'espèce, rend son rajeunissement moins incertain et accélère la fermentation. •
Dans les urines normales alcalinisées et stérilisées par filtration, la production du ferment soluble est incomparablementplus élevée, l'urine acquiert une viscosité manifeste. ”

“ D'un autre côté, si on opère les hydratations à des températures plus basses, ces dernières doivent être appliquées pendant plus de temps et ne sont pas moins nuisibles alors même qu'on fait abstraction de l'action toxique du carbonate d'ammonium sur le ferment soluble de l'urée.
On est donc conduit par ces diverses expériences à admettre le fait que j'ai plusieurs fois annoncé : que l'urase est notablement détruite au degré de chaleur qui correspond à son optimum d'action. ”